梁书卿，魏 枫，孙洪莉，郑 朦，王晓艳，李冉浩，马玉博

甲状腺癌是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤，在过去几十年的发病率呈逐年上升趋势[1]。肿瘤的发生涉及基因的多种复杂变化及基因表型的改变，其中，表观遗传学改变在肿瘤的发生发展中起了重要的作用，DNA甲基化是一种由DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)介导的化学修饰，与肿瘤的发生发展密切相关[2-4]。死亡相关蛋白激酶基因(death-associated protein kinase，DAPK)启动子区域甲基化促进多种肿瘤的发生，但在甲状腺乳头状癌上少有报道，是目前研究的热点之一[5-6]。因此，抑制DNMTs可能作为治疗甲状腺癌的靶点，5-Aza-CdR是一种甲基转移酶抑制剂，研究[7-8]显示该药已经成功作用于肺癌、白血病等肿瘤，而在甲状腺癌中作用尚不清楚。该文以甲状腺乳头状癌细胞系及甲状腺正常细胞系为研究对象，通过体外给予5-Aza-CdR来观察细胞系中DAPK、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA和蛋白表达的情况，为研究甲状腺癌的发生发展机制及治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料人正常甲状腺细胞(Nthy-ori-3)、人甲状腺乳头状细胞(TPC-1)均购自复旦细胞库；去甲基化制剂5-Aza-CdR购自美国Sigma公司；1640培养基、胎牛血清、PBS均购自美国Gibco公司；反转录试剂盒购自日本Toyobo公司；一抗GAPDH、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B均购自美国CST公司；DAPK抗体购自英国Abcam公司；抗兔辣根过氧化酶(HRP)Ig G二抗购自北京中杉金桥技术有限公司；引物均由上海生物技术公司合成；RealSYBR Mixture购自北京康为世纪生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1Nthy-ori-3、TPC-1细胞的培养及细胞模型的制备 Nthy-ori-3、TPC-1细胞在含10%胎牛血清的1640培养基，37 ℃、 5%CO2孵育箱中培养，2～3 d传代。根据实验要求，将细胞分别接种于培养皿或孔板中，取对数生长期细胞进行下一步实验。……