吉杨丹，罗红阳，王 丹，王 恒，杨小燕，何志旭，刘金河，汪显耀，赵 锦，张丽娟，张玲敏，秦 臻，许键炜，

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)因具有自我复制和多向分化潜能，可用于多种损伤性疾病的组织重建与修复[1]。临床和动物实验研究发现，MSCs能靶向受损的肝组织，对急慢性肝损伤均有修复作用，但疗效并不稳定，个体差异非常大。究其原因，可能与MSCs的迁移归巢和分化以及局部微环境的影响有着密切的关系[2]。研究[3]发现，肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)能趋化MSCs向病灶部位迁移。同时微小RNA (microRNA，miRNA)参与了细胞的迁移、增殖、分化[4]，在生命活动中起重要作用。课题组前期研究[5]发现miR-26b和Wnt/β-catenin信号通路参与了 MSCs干性的维持以及趋化迁移的调控。该实验以miR-26b作为研究靶点，初步探讨其对Wnt/β-catenin信号通路以及成肝样不同分化状态MSCs向HGF趋化迁移的影响，为MSCs作为种子细胞定向迁移治疗肝损伤及相关机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料SD大鼠[贵州医科大学实验动物中心，动物合格号SYXK(黔)2018-0001]，L-DMEM培养基、l0%FBS及0.25%EDTA(美国Hyclone公司)，HGF、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)(美国Sigma公司)，相差显微镜(德国Leica公司)，CO2培养箱(美国Thermo Forma公司)，Transwell小室(美国Corning公司)，超净工作台(苏州苏净集团)，细胞培养箱(Model311)、SYBR Green RT-qPCR 试剂盒(美国Thermofisher公司)，台式高速冷冻离心机(Allegra 64R，美国贝克曼库尔特公司)，qRT-PCR仪(StepOne，美国ABI公司)，U-LH100L-3活细胞工作站(日本OLYMPUS公司)，TRIzol、转染试剂(美国Ambion公司)，miR-26b引物(广州锐博生物科技公司)，Q-PCR引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.2 实验方法

1.2.1大鼠MSCs的培养、鉴定 取5～8周龄、体质量(150±20) g SD大鼠，乙醚麻醉处死后取两侧股骨，剪去股骨两端，用注射器吸取L-DMEM混合液从骨髓腔反复冲出骨髓至无菌平皿中。……