谢亚锋，许志杰，丁雅婷，闫圣玉，张 侨，刘菀莹，刘丽兵

结肠癌是最常见的消化道肿瘤之一，在全球癌症相关死亡率中排行第三[1]。由于结肠癌具有局部复发、远处转移以及化疗耐药的特性，是一种高死亡率的疾病[2]。寻找更多的潜在治疗性生物靶标是治疗结肠癌的理想思路。AMP依赖的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)是能量代谢调节关键因子，参与调控介导自噬的过程[3]。自噬通过消化功能失调的蛋白质和细胞器，在致癌作用中起重要作用[4]。抗菌肽LL-37是人体内发现的一种组织蛋白酶类抗菌肽，由前体肽hCAP-18水解释放[5]。研究[6-9]表明，LL-37在胃癌、肺癌、黑色素瘤及白血病中异常表达。作为肿瘤抑制因子，hCAP18/LL-37在胃腺癌和淋巴细胞白血病中表达下调。然而，AMPK和自噬是否参与了抗菌肽LL-37对结肠癌细胞凋亡的调控尚不明确。该研究探讨了抗菌肽LL-37对结肠癌HT-29细胞凋亡的作用机制，为明确相关作用机制提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 细胞株与主要试剂人结肠癌细胞株HT-29购自北京北纳生物(BNCC)细胞库。McCOY's 5A培养基购自美国SIGMA公司；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自美国Gibco公司；AMPK抑制剂购自德国Merck公司；抗菌肽LL-37购自上海锐东生物科技有限公司；Annexin-V FITC/PI双染试剂盒购自上海贝博生物公司；BCA蛋白定量试剂盒、RIPA裂解液均购自上海碧云天生物技术有限公司；ECL化学发光试剂盒购自美国Thermo公司；兔抗Bax(1 ∶1 000)、兔抗Bcl-2(1 ∶2 000)、兔抗p-AMPK(1 ∶1 000)、兔抗LC3A(1 ∶50 000)、兔抗LC3B(1 ∶1 000)、兔抗GAPDH(1 ∶2 500)、兔抗AMPK(1 ∶1 000)、兔抗Beclin1(1 ∶2 000)、兔抗Atg5(1 ∶1 000)、二抗山羊抗兔IgG(1 ∶2 000)均购自英国ABCAM公司。

1.2 实验仪器超净工作台购自苏州智净净化设备有限公司； CO2恒温细胞培养箱购自美国Thermo公司；……