马牧天，谭振亚，周园琴，吴梦月，郑 红

骨髓增殖性肿瘤 (myeloproliferative neoplasma，MPN)是一类以一种或几种骨髓细胞持续异常增殖为特征的疾病，被认为是髓系肿瘤的一种[1]。在病理后期可转化为急性白血病。蛋白质酪氨酸磷酸酶2(domain-containing protein-tyrosine phosphatase-2, SHP2)是一种由Ptpn11基因编码的非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶，在造血细胞的生长发育、增殖分化过程中起着十分重要的作用。多种类型的白血病患者体内存在SHP2蛋白的异常活化，因此，SHP2被认为是白血病的原癌基因[2-4]。谷氨酰胺转运蛋白2(alanine-serine-cysteine transporter 2, ASCT2)是由Slc1a5基因编码的中性氨基酸载体，在多种癌症中可通过调节肿瘤细胞对谷氨酰胺的摄入来影响肿瘤的发病，抑制ASCT2的表达则可有效的抑制癌细胞的恶性增殖[5-7]，但血液系统疾病与ASCT2相关的研究报道很少，与MPN发病机制的关系研究尚不清楚。该研究通过构建SHP2激活突变鼠，观察ASCT2对SHP2激活突变后致骨髓增殖性肿瘤的调控作用，为临床治疗寻找新的靶点提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞株 自实验小鼠体内分离的原代细胞，包括小鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，MSC)：MSC(Ptpn11+/+)和MSC(Ptpn11E76K/+)；造血干细胞(hematopoietic stem cells, HSC): HSC(Ptpn11+/+)和HSC(Ptpn11E76K/+)。

1.1.2主要试剂 Western blot实验抗体购自美国Cell Signaling公司；Glutamate Assay Kit购自美国Cell BIOLABS公司；DMEM、胰蛋白酶(Trypsim)购自美国Gibco公司；胎牛血清(FBS)、青链霉素混合溶液(双抗)购自美国Hyclone公司；PBS粉末、牛血清白蛋白(BSA)购自美国Sigma公司；其他试剂和耗材均购自上海生物工程(生工)股份有限公司。

1.1.3主要仪器 细胞培养箱(型号ELCETRON CORPORATION)、酶标仪(型号3001)、高速低温离心机(型号MultifugeX1R)购自美国赛默飞世尔科技公司；恒温磁力搅拌器(型号79HW-1)、涡旋振荡器(型号XH-89)购自乐清乐成电器厂；……