尚国富，刘江丽，于 欢，唐开义，曾 柱,3，胡祖权,3，王 赟

前列腺癌是男性常见的癌症，也是男性癌症死亡三大原因之一[1]。前列腺癌的患病率在我国呈现迅速上升的趋势，该癌症成为危害我国男性健康的重要疾病[2]。因此，建立快速、有效的前列腺癌检测技术体系，对于临床诊断和治疗具有重要作用。前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen, PSCA)是一种糖基磷脂酰肌醇锚定细胞表面蛋白，在前列腺组织中的表达有很高的特异性，其表达水平在前列腺癌组织中显著高于正常前列腺组织[3]。因此，PSCA被认为是诊断和预后前列腺癌的生物标志物，也是治疗的理想靶点[3-4]。该研究分别构建PSCA以及抗PSCA单链抗体(single-chain variable fragment, scFv)与碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AP)融合蛋白的原核表达体系，大量表达并检测其活性，为后期发展基于融合蛋白的免疫检测技术提供实验支持。

1 材料与方法

1.1 实验材料大肠杆菌BL21(DE3)、大肠杆菌XL1-Blue、pET-32a载体及pDAP2/S载体由华中农业大学分子生物技术实验室馈赠。pET-32a载体含有TrxA基因，PSCA基因构建到该载体中可诱导表达重组TrxA-PSCA融合蛋白，pDAP2/S载体含有AP基因，PaFv基因构建到该载体中可诱导表达重组PaFv-AP融合蛋白。T4 DNA连接酶、Taq聚合酶、RNAase、DNA Marker购自日本Takara公司；Tryptone、Yeast extract购自英国Oxoid公司；DNA凝胶回收试剂盒购自杭州爱思进生物技术有限公司；BCIP/NBT显色试剂购自武汉博士德生物工程有限公司；蛋白Marker购自美国Thermo-Fisher公司；抗His单克隆抗体、AP标记羊抗小鼠特异抗体、对硝基苯磷酸二钠(pNPP)购自美国Sigma-Aldrich公司；BCA蛋白质定量试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司。

1.2 PCR引物根据NCBI数据库中的PSCA基因序列，利用Primer Primer 5.0软件设计扩增PSCA成熟肽序列的引物，引物(表1)由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。……