刘泓渊 成刚 李宗平( 通讯作者)

( 绵阳市中心医院神经外科 四川 绵阳 621000）

胶质瘤是最常见的中枢性肿瘤[1]。尽管经过积极的治疗，胶质瘤患者的预后仍较差。胶质瘤的预后与肿瘤分期、遗传和表观遗传学分子特征等生物学和临床特征相关。DNA 甲基化作为表观遗传学的一部分，被认为是人类肿瘤常见的分子学改变，通常发生在CpG 位点。在正常组织中，大量基因的CpG 位点未发生甲基化，但是在肿瘤中发生甲基化，如乳腺癌，卵巢癌，结肠癌、前列腺癌和胶质瘤。CpG 序列富集的DNA片段叫CpG 岛。CpG 岛甲基化与抑癌基因转录沉默密切相关。

乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（maspin）在乳腺、前列腺、口腔等组织中表达，在上述癌组织中表达下调。Maspin 在正常脑组织及胶质瘤中的表达水平罕见报道。有研究表明在众多肿瘤中maspin 受表观遗传学调控，主要涉及到CpG 岛甲基化。生物信息学分析表明maspin 具有6 个CpG 岛，其中1 个位于启动子区，而maspin 在胶质瘤中表达沉默。本文旨在探索maspin 基因在胶质瘤中表达沉默与表观遗传学的关系。

1.资料和方法

1.1 主要材料

人前列腺癌细胞株PC3( 阳性对照)、胶质瘤细细胞株U343 来源于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-A z a-DC)来源于Sigma 公司，10% 胎牛血清为Hyclone 公司产品，RNA 提取试剂购自Invitrogen 公司，逆转录试剂盒和DNA 提取试剂盒为Fermentas 公司产品，甲基化试剂盒购自Zymo Research 产品。Maspin 引物由Invitrogen 设计、合成。MethPrimer 设计甲基化引物和非甲基化引物，primer6.0 设计内参GAPDH 基因引物。

1.2 细胞培养

细胞培养于含有10%胎牛血清及100U/m L 浓度的双抗的完全培养液。……