李雪，伍艳平，周铁军，龚莉

1西南医科大学附属医院，四川泸州 646000；2宜宾市第二人民医院

宫颈癌发病率居妇女恶性肿瘤第二位，且呈逐年上升趋势[1]，晚期患者生存和预后情况不容乐观。因此，寻找宫颈癌转移、复发的关键机制和调控靶点，并对其进行预防和治疗十分重要。微小RNA-451(miRNA-451)属于非编码RNA，是转录后调节的重要调控子，在多种肿瘤中存在异常表达，其表达与肿瘤发生和转移有一定关系[2-5]。c-myc是myc家族中的主要成员，是较早发现的癌基因之一[6]。c-myc被认为是细胞增殖、生长、分化和凋亡的重要调节因子，在许多肿瘤中被激活，蛋白产物表达升高，其表达和活性受miRNA的调控[7]。上皮间质转化(EMT)是肿瘤发生发展的重要过程，肿瘤细胞通过上皮表型[如E-钙黏蛋白(E-cadherin)]的丢失和间质表型[如波形蛋白(Vimentin)]的获得增加迁移、侵袭能力。本研究观察了宫颈鳞癌组织中miRNA-451、c-myc、E-cadherin、Vimentin的表达变化，并探讨其意义。

1 材料与方法

1.1 材料 选取2015年1月—2016年1月西南医科大学附属医院病理科存档的宫颈鳞癌组织蜡块61例份，患者年龄31～62(45.88±6.56)岁，其中≥50岁20例、<50岁41例；依据国际妇产科联盟(FIGO)的宫颈癌分期：Ⅰ期47例，Ⅱ期14例；病理分型：角化型鳞癌21例，非角化型鳞癌40例；淋巴结转移17例，无淋巴结转移44例。所有病例均经病理确诊，且术前均未接受放化疗等抗肿瘤治疗。另选癌旁宫颈上皮内瘤变(CIN)组织蜡块30例份和正常宫颈组织蜡块20例份作对照。本研究征得患者及家属知情同意并签署知情同意书，并获得西南医科大学附属医院伦理委员会批准。

1.2 组织miRNA-451、c-myc、E-cadherin、Vimentin检测方法 ①miRNA-451：采用原位杂交法，按照原位杂交试剂盒说明书进行操作，主要步骤为石蜡组织标本连续切片(6～8 μm)，后脱蜡，3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶活性，蛋白酶处理后1%多聚甲醛室温固定10 min；滴加20 μL预杂交液38～42 ℃孵育2～4 h，滴加20 μL杂交液38～42 ℃过夜；SSC严格浸洗(2×SSC 5 min、2×SSC 5 min、0.5×SSC 15 min、0.2×SSC 15 min，37 ℃)，封闭液37 ℃孵育30 min，滴加生物素化地高辛及SABC分别在37 ℃条件下孵育60 min及30 min后，DAB显色(显微镜下控制显色时间)，苏木素复染，酒精脱水、二甲苯透明后、中性树脂封片。……