官俏兵 张晓玲 沈和平 俞晓翔 阮水良

近年来，星形胶质细胞在中枢神经系统中的作用得到了较多的研究[1]。在缺血缺氧性脑病的研究中发现星形胶质细胞可以通过自身炎症反应释放大量炎症因子，造成神经细胞损伤[2-3]。缺血缺氧条件下，缝隙连接蛋白（Cx43）的表达增加，且空间分布发生改变，从而调控细胞通道蛋白表达，介导物质交换。Cx43还可以通过增加星形胶质细胞半通道的开放、减少全通道的活性来增加神经细胞的敏感性，促进细胞死亡的发生[4-5]。缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1 alpha，HIF-1α）可以促进凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因相关X蛋白（B-cell lymphoma-2 associated X，BAX）的表达，B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白下调，而HIF-1α敲除后可以明显抑制缺血缺氧性脑损伤[6-7]。也有研究表明，HIF-1α的高表达可以促进血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达，激活血管内皮细胞生长因子受体2通路，促进脑血管的新生[8]。鉴于Cx43在缺血缺氧性脑病中的重要作用，本研究对糖氧剥夺（oxygen glucose deprivation，OGD）条件下，HIF-1α 上调Cx43表达造成星形胶质细胞损伤的作用机制进行了进一步探讨。

1 材料和方法

1.1 主要材料 人星形胶质细胞HA细胞株（实验室自备）；HEK293T细胞（武汉普诺赛生命科技有限公司，批号：CL0005）；大肠杆菌感受态细胞 DH5α（北京天根生化科技有限公司，批号：CB10101）；慢病毒载体GV218、阴性对照慢病毒（上海吉凯公司，批号：K857435）；RT-qPCR试剂盒（北京索莱宝科技有限公司，批号：18573364）；质粒抽提试剂盒（美国Promega公司，批号：194754）；DMEM、Opti-MDM 培养基（美国 Invitrogen公司）；Lipofectamine 2000（美国 Invitrogen公司）；HIF-1α和Cx43的引物（上海生工生物工程公司合成）；HIF-1α 的小干扰 RNA（siRNA）及对照（苏州吉玛公司）；……