黄丽芸 陈小兵 袁章林

关键词：细叶石仙桃;总黄酮;含量测定

细叶石仙桃多生长于江西、福建、广东等地，归属于兰科石仙桃属脱苞组植物，中医药资料记载该植物性甘味凉，临床具有养阴清热、利湿散瘀之功效，目前对江西赣南地区的细叶石仙桃的活性成分研究较少，本团队前期已对其黄酮类成分的提取及抗肿瘤活性有所研究，现针对细叶石仙桃中总黄酮类成分进行含量测定，完善细叶石仙桃的质量评价体系。

1 仪器与试药

仪器：电子天平（Sartorius北京有限公司）;UV-9000

（上海元析仪器）;试药：芦丁标准品;细叶石仙桃（自采），经中药炮制技艺“樟帮”传承人颜干明鉴定为兰科石仙桃属细叶石仙桃。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备

取一定量芦丁标准品，精密称定，加70%乙醇溶解，转移至25mL容量瓶，随后稀释至刻度并定容，得对照品溶液，浓度为0.1mg/mL。

2.1.2 供试品溶液的制备

称取细叶石仙桃药材粉末5g，加95%乙醇回流提取1h，过滤，重复提取2次，合并滤液;将滤液蒸干，剩余残渣加入20mL蒸馏水，使其完全溶解;分别用石油醚、四氯化碳脱脂、萃取，取水层调pH值至沉淀完全;在沉淀中加入70%乙醇，溶解并转移至50mL容量瓶，稀释至刻度定容，得供试品溶液。

2.2 测定方法及波长选择

测定方法：取25mL容量瓶3支，编号为1、2、3，分别加入芦丁对照品溶液2.0mL、空白溶剂2.0mL、供试品溶液2.0mL，再分别加入5% NaNO2溶液0.5mL，振摇15s，静置5min，加10% Al（NO3）3溶液0.5mL，振摇15s，静置5min，再加入4%NaOH溶液4mL，用力振摇15s，最后加70%乙醇定容，靜置20min。

在波长选择上，将上述溶液分别在400～700nm范围内扫描，发现1、3号溶液均在510nm处出现最大吸收峰;2号溶液在510nm处未见吸收峰，故检测波长确定为510nm。

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线的绘制

取10mL容量瓶6支，编号为1-6，精密量取2.1.1项下所得芦丁对照品溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5mL分别置6只10mL容量瓶中，按2.2测定方法及波长选择项下“加入5% NaNO2溶液……静置20min”操作，测定吸光度，记录数据。以浓度C（mg/mL）为横坐标（X），其对应吸光度A为纵坐标（Y），绘制A-C关系曲线，建立回归方程。

2.3.2 精密度试验

取10mL容量瓶1支，精密量取2.1.1项下所得对照品溶液3.0mL，置容量瓶中，按2.2测定方法及波长选择项下“加入5% NaNO2溶液……静置20min”操作，测定A值，连续测定5次，计算RSD。

2.3.3 重复性试验

取25mL容量瓶5支，编号为1-5，精密量取2.1.2项下所得供试品溶液2.0mL，置容量瓶中，按2.2测定方法及波长选择项下“加入5% NaNO2溶液……静置20min”操作，测定A值，平行测定5份，计算RSD。

2.3.4 稳定性试验

取25mL容量瓶1支，精密量取2.1.2项下所得供试品溶液2.0mL，置容量瓶中，按2.2测定方法及波长选择项下“加入5%NaNO2溶液……静置20min”操作，在1h内每隔10min测定相应A值，计算RSD。

2.3.5 加样回收率试验

取25mL容量瓶5支，编号为1-5，精密量取2.1.2项下所得供试品溶液1.0mL，置容量瓶中，平行5份，依次加入2.1.1项下对照品溶液5.0mL，再按2.2测定方法及波长选择项下“加入5%NaNO2溶液……静置20min”操作，测定A值，计算回收率和RSD。

2.4 细叶石仙桃中总黄酮的含量测定

取25mL容量瓶3支，编号为1-3，精密量取2.1.2项下所得供试品溶液2.0mL，置容量瓶中，平行3份，按2.2测定方法及波长选择项下“加入5% NaNO2溶液……静置20min”操作，测定A值，计算含量和RSD。

2.5 结果

方法学考察结果：①线性关系：将所得数据绘制标准曲线，得回归方程：A=17.896C+0.0202，r=0.9998，线性关系良好;②精密度：按2.3.2精密度试验操作，得RSD值为1.2%，所用仪器精密度较好;③重复性：按2.3.3重复性试验操作，得RSD值为1.0%，所用试验方法可重复性强;④稳定性：按2.3.4稳定性试验操作，得RSD值为1.5%，细叶石仙桃提取液在1h内稳定性较好;⑤加样回收率：按2.3.5加样回收率试验操作，得回收率为99.09%，RSD值为2.0%（表1），试验测试结果良好。含量测定结果按2.4 项下含量测定试验操作，计算得细叶石仙桃中总黄酮含量为5.36mg/g，RSD值为0.5%（表2）。

3 讨论

本试验利用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH系统对细叶石仙桃提取液显色，利用黄酮类化合物的酚羟基及还原性羰基的特点，将黄酮先还原再络合最后开环显色，再通过紫外测定吸光度，计算其中总黄酮类成分的含量，整个反应可操作性强，简便易行，所得结果回收率良好，可应用于细叶石仙桃中总黄酮的含量测定。

参考文献：

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：18卷[M].北京：科学出版社，2009.390-400.

[2]Yang Shumei，Jiang Pei，Li Dandan.et al.Determination of Total Flavonoid Content in Gentian[J].Heilongjiang Medicine.2014，3（27）：469-472.

作者简介：

黄丽芸（1988- ），女，赣南卫生健康职业学院讲师，主管中药师，研究方向为天然药物有效成分分析。

基金项目：江西省卫生计生委中医药科研基金资助项目（2018A346）