陈园园 李明霞 刘颖 张子路 杨秋波

[摘要] 目的 制备特异性识别牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.g）的单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）。 方法 ①采用杂交瘤的方法制备mAb，用P.g重组血凝素2（recombinant Hemagglutinin 2，rHA2）免疫BALB/c小鼠，间接ELISA筛选特异性识别P.g的杂交瘤细胞株;②间接ELISA检测mAb的效价及识别P.g的特异性、敏感性。 结果 筛选到5株特异性识别P.g的mAbs，C10、F3、F3-2、G3和G3-2。其中，C10、G3和G3-2免疫球蛋白亚类为IgG2a型;F3和F3-2免疫球蛋白亚类为IgG1型。mAb C10、G3、F3和F3-2識别P.g的效价均>1∶128 000;mAb G3-2识别P.g的效价>1∶16 000;5株mAb识别rHA2的效价均>1∶128 000。5株mAb均特异性识别>5×105 cfu/mL的P.g ATCC33277。 结论 制备了5株特异性识别P.g的mAb，可用于各种免疫学技术，为开发P.g检测工具提供了条件，对牙周病的诊断和治疗有一定的意义。

[关键词] 单克隆抗体;牙龈卟啉单胞菌;血凝素;杂交瘤技术

[中图分类号] R781.4          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）18-0042-05

Preparation of specific anti-Porphyromonas gingivalis monoclonal antibody

CHEN Yuanyuan   LI Mingxia   LIU Ying   ZHANG Zilu   YANG Qiubo

School of Stomatology， Capital Medical University， Beijing Institute of Dental Research， Beijing  100050， China

[Abstract] Objective To prepare specific anti-Porphyromonas gingivalis（P.g） monoclonal antibody（mAb）. Methods （1）mAb was prepared through the hybridoma method， BALB/c mice were immunized with recombinant hemagglutinin 2（rHA2）， and hybridoma cell lines were screened by indirect ELISA. （2）Indirect ELISA was used to detect the titer of mAb and to recognize the specificity and sensitivity of P.g. Results The five mAbs of C10， F3， F3-2， G3 and G3-2 were screened for specific recognition of P.g. Among them， C10， G3 and G3-2 immunoglobulin subclasses were the IgG2a type; F3 and F3-2 immunoglobulin subclasses were the IgG1 type. The titer of mAb C10， G3， F3 and F3-2 recognizing P.g was>1：128 000; the titer of mAb G3-2 recognizing P.g was>1：16 000; the titer of 5 mAbs recognizing rHA2 was>1：128 000. All specific mAbs recognize P.g ATCC33277 no less than 5×105 cfu/mL. Conclusion 5 mAbs for P.g specific recognition have been prepared， which can be used in various immunological techniques， providing conditions for the development of P.g detection tools. It is of a certain significance for the diagnosis and treatment of periodontal diseases.

[Key words] Monoclonal antibody; Porphyromonas gingivalis; Hemagglutinin; Hybridoma technique

牙周炎是牙周支持组织的破坏性疾病，是全球广泛流行的口腔疾病之一。牙周炎不仅降低患者的生活质量，还会给患者造成沉重的经济负担[1]。2015年全球有35亿人罹患口腔疾病，其中5.38亿为重度牙周炎，随着人口的不断增长和老龄化，该数字会继续增长[2]。牙周炎不仅是成年人失牙的主要因素，还是心血管疾病[3]、类风湿性关节炎[4]、糖尿病[5]以及阿尔茨海默症[6]等系统性疾病的危险因素。在牙周致病菌中，牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.g）被认为是最主要的致病菌之一[7，8]，其口内水平可以预测疾病的进展[9]，且与以上系统性疾病均相关[10]，因此对P.g的检测至关重要。目前P.g的检测主要依靠实时定量聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR），但RT-PCR存在昂贵，需要提取、分离DNA，需要大型设备及熟练操作人员的问题而难以在临床应用[11]。随着个性化医疗……