姜爱雯　杜佩珊　王淑珍　石金铮　刘云宁　李方江

[摘要] 目的 通過建立高脂血症大鼠模型考察阿昔莫司联合氯吡格雷对高血脂大鼠血脂及颈动脉粥样硬化的改善作用。 方法 从45只大鼠中选取10只大鼠作为正常组给予普通饲料喂养，剩余35只大鼠给予高脂饲料造模，连续造模4周，随机选取其中5只以总胆固醇（TC）水平升高且与正常组比较差异有统计学意义来判断造模成功与否。将剩余30只造模成功大鼠随机分成模型组、阿昔莫司组（32 mg/kg）、联合组（阿昔莫司32 mg/kg+氯吡格雷10 mg/kg），每组10只。检测大鼠体重、血脂指标、血液血流变相关参数及血清炎性因子水平，小动物超声仪检测大鼠颈动脉血管内膜厚度（IMT）和颈动脉血管中膜厚度（MT）。 结果 阿昔莫司组血脂中三酰甘油（TG）、TC、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平低于模型组而高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平高于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;两组体重比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。联合组血脂中TG、TC、LDL-C水平明显低于模型组，同时TC、LDL-C水平低于阿昔莫司组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。阿昔莫司组全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数明显低于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。联合组全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数明显低于模型组且全血黏度指标（切变率5和1）、血浆黏度及红细胞聚集指数低于阿昔莫司组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。阿昔莫司组血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平低于模型组而IL-10水平高于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。联合组血清中TNF-α、IL-6水平低于模型组及阿昔莫司组，IL-10水平高于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。模型组、阿昔莫司组及联合组IMT、MT均高于正常组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。阿昔莫司组IMT、MT低于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;联合组MT明显低于模型组及阿昔莫司组，IMT低于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。 结论 阿昔莫司有效改善高脂饮食导致的大鼠血脂升高及颈动脉粥样硬化，合用氯吡格雷保护作用更加显著。

[关键词] 阿昔莫司;氯吡格雷;高血脂;颈动脉粥样硬化

[中图分类号] R743          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）06（c）-0019-05

[Abstract] Objective To investigate the effect of the improvement of serum lipids and carotid atherosclerosis in hyperlipidemia rats by Acipimox combined with Clopidogrel in a hyperlipidemia rat model. Methods Ten rats from 45 rats were given normal feed as the normal group. The remaining 35 rats were given high-fat feed to model for 4 consecutive weeks， and 5 of them were randomly selected to judge whether the model was successful or not with increased total cholesterol （TC） level and statistically significant difference compared with the normal group. After successful modeling， the remaining 30 rats were randomly divided into the model group， the Acipimox group （32 mg/kg）， and the combined group （32 mg/kg Acipimox + 10 mg/kg Clopidogrel ）， with 10 rats in each group. The body weight， blood lipid index， hemorheology relevant parameters and serum inflammatory factors of the rats were measured. The carotid artery intimal thickness （IMT） and carotid artery  media  thickness （MT） were measured by small animal ultrasound. Results The levels of triglyceride （TG）， TC and low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C） in blood lipid of the Acipimox group were lower than those of the model group， while the levels of high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C） were higher than those of the model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. There was no significant difference in body weight between the two groups （P > 0.05）. The levels of TG， TC， and LDL-C in serum lipids in the combined group were significantly lower than those in the model group， while the levels of TC and LDL-C in the combined group were lower than those in the Acipimox group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. The whole blood viscosity， plasma viscosity and erythrocyte aggregation index in Acipimox group were significantly lower than those in model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. The whole blood viscosity， plasma viscosity and erythrocyte aggregation index in the combined group were significantly lower than those in the model group， and the whole blood viscosity index （shear rate 5 and 1）， plasma viscosity and erythrocyte aggregation index in the combined group were significantly lower than those in the Acipimox group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Serum levels of tumor necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin-6 （IL-6） in the Acipimox group were lower than those in the model group， while IL-10 were higher than those in the model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. The serum levels of TNF-α and IL-6 in the combined group were lower than those in the model group and the Acipimox group， and the level of IL-10 in the combined group was higher than that in the model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. IMT and MT in the model group， the Acipimox group and the combined group were all higher than those in the normal group， and the differences were statistically significant （P < 0.05）. IMT and MT in Acipimox group were lower than that in model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. MT in the combined group was significantly lower than that in the model group and the Acipimox group， and IMT was significantly lower than that in the model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. Conclusion Acipimox can effectively improve the hyperlipidemia and carotid atherosclerosis in rats induced by high-fat diet， and the protective effect is more significant when combined with Clopidogrel.

[Key words] Acipimox; Clopidogrel; Hyperlipidemia; Carotid atherosclerosis

随着我国社会经济的高速发展，人民生活水平的不断提高，生活节奏的不断加速，伴随而来的是饮食结构的改变，富含高脂食物的摄入量逐步增加，引发的动脉粥样硬化性心血管疾病（arteriosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）成为了威胁人类健康的主要疾病[1]。心脑血管疾病的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，其中以动脉粥样硬化为病理基础的冠心病和缺血性脑卒中占主要部分[2-3]。

高脂饮食导致机体血脂明显高于正常状态，主要体现在机体总胆固醇（TC）和/或三酰甘油（TG）过高，高密度脂蛋白（HDL）过低等，而脂代谢的紊乱可以导致机体氧化应激反应的发生，机体过多的活性氧（ROS）无法被抗氧化酶消除，导致机体中的低密度脂蛋白（low density lipoproteins，LDL）在动脉壁被ROS氧化修饰形成氧化型低密度脂蛋白（oxidized low densitylipoprotein，ox-LDL）[4-5]。ox-LDL是导致血管内皮损伤的重要因素。ox-LDL可增加内皮细胞对LDL的通透性，引起胞浆发生空泡变性，浆膜皱缩，并导致内皮细胞凋亡发生并最终坏死[6]。血管内皮损伤的发生是诱发动脉粥样硬化的关键因素之一，此外血小板的凝聚也是诱发动脉粥样硬化的关键因素之一，其中颈动脉粥样硬化又是脑卒中的主要因素[7-8]。因此有效的降低血脂水平，改善血小板凝聚是治疗高脂血症诱发动脉粥样硬化的关键。阿昔莫司属于烟酸类新型血脂调节药物，可以显著降低机体血脂水平[9]。氯吡格雷属于血小板聚集抑制剂，临床中主要用于介入手术后的动脉硬化的治疗及预防，有研究显示氯吡格雷与他汀类合用可以显著改善机体血脂及动脉粥样硬化[10-11]，但是氯吡格雷与阿昔莫司合用后对高脂血症大鼠血脂及动脉粥样硬化的保护作用还有待探究。因此本研究采用高脂饲料喂养的大鼠，考察阿昔莫司及其与氯吡格雷合用对高脂血症大鼠血脂及动脉粥样硬化的改善作用。

1 资料与方法

1.1 资料

阿昔莫司（鲁南贝特制药有限公司，20160812）;氯吡格雷（赛诺菲制药公司，20161011）;高脂饲料（南通特洛菲生物科技有限公司，TP26001，其中每公斤含：酪蛋白195 g、淀粉150 g、蔗糖342 g、脂肪210 g、胆固醇1.5 g、纤维素50 g，20170106）。SPF级雄性SD大鼠，体重180～220 g，45只，购自北京华阜康生物科技有限公司，饲养于温度18～26℃，相对湿度40%～70%，SPF级动物实验室，动物许可证号：SCXK（京）2014-0008，实验通过河北北方学院附属第一医院伦理委员会审批（批件编号：201801-23号）。

1.2 试剂

TC（南京建成科技有限公司，批号：20170316）;TG测定试剂盒（南京建成科技有限公，批号：20170403）;TC测定试剂盒（南京建成科技有限公司，批号：20170 327）;低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定试剂盒（南京建成科技有限公司，批号：20170412）;高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定试剂盒（南京建成科技有限公司，批号：20170611）。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-10酶联免疫吸附试验试剂盒（碧云天生物技术公司，批号：PT512、PI328，PI525）。

1.3 仪器

赛多利斯分析天平（法国赛多利斯公司，CPA225D，精度0.001 g）;全自动酶标仪（瑞士Tecan公司，InfiniteMPr200型）;全自动血流变分析仪（德国美创，Coatron 1800）。

1.4 动物模型建立及分组

45只大鼠适应性喂养1周后，选取10只大鼠作为正常组给予普通饲料喂养，剩余35只大鼠给予高脂饲料造模，连续造模4周，随机选取其中5只大鼠以TC水平升高且与正常组比较差异有统计学意义来判断造模成功与否。将剩余30只造模成功大鼠随机分成3组，每组10只。模型组、阿昔莫司组（32 mg/kg）、联合组（阿昔莫司32 mg/kg+氯吡格雷10 mg/kg）。各给药组按相应剂量灌胃给药，1次/d，连续灌胃4周，正常组和模型组给予体积相同的生理盐水。正常组继续给予普通饲料，其余各组均继续给予高脂饲料。

1.5 血清中血脂、炎性因子及血液流变学测定

采用酶联免疫法检测TC、HDL-C、LDL-C、TG、TNF-α、IL-6指标，实验方法参照试剂盒说明书。采用全自动生化分析检测血液流变学指标。

1.6 大鼠颈动脉超声检测

将大鼠仰卧位固定于平板上，采用SD-1700彩色超声仪测量颈动脉血管内膜（IMT）、颈动脉血管中膜（MT）。颈部侧伸45°，取颈动脉长轴切面测量颈总动脉、颈内和颈外动脉起始端管腔内膜交界面到内膜与外膜交界处之间的垂直距离，位置为双侧颈总动脉、颈动脉分叉处，连续测量3个心动周期，取其平均值为IMT、MT。

1.7 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对所得数据进行分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 結果

2.1 阿昔莫司联合氯吡格雷对大鼠血脂水平及体重的影响

模型组大鼠体重及TG、TC、LDL-C水平明显高于正常组，但HDL-C水平明显低于正常组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。阿昔莫司组TG、TC、LDL-C水平低于模型组而HDL-C水平高于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05），两组体重比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。联合组血脂中TG、TC、LDL-C水平明显低于模型组，同时TC、LDL-C水平低于阿昔莫司组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表1。

2.2 阿昔莫司联合氯吡格雷对高脂血症大鼠血液流变学的影响

造模8周后，模型组全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数明显高于正常组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。阿昔莫司组全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数明显低于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。联合组全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数明显低于模型组且全血黏度指标（切变率5和1）、血浆黏度及红细胞聚集指数低于阿昔莫司组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表2。

2.3 阿昔莫司联合氯吡格雷对高脂血症大鼠血清炎性因子水平的影响

高脂饲料喂养8周后，模型组血清中TNF-α、IL-6水平高于正常组，而IL-10水平低于正常组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。阿昔莫司组血清中TNF-α、IL-6水平低于模型组，而IL-10水平高于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。联合组血清中TNF-α、IL-6水平低于模型组及阿昔莫司组，IL-10水平高于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表3。

2.4 阿昔莫司联合氯吡格雷对大鼠颈动脉超声检测结果的影响

模型组、阿昔莫司组及联合组大鼠IMT、MT高于正常组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。阿昔莫司组大鼠IMT、MT低于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;联合组大鼠MT明显低于模型组及阿昔莫司组，IMT低于模型组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表4。

3 讨论

高脂血症是诱发心血管疾病的重要因素之一，高血脂可以导致血管内皮损伤的发生，继而影响心血管功能导致心血管疾病的发生[12-15]。血清TG、TC是评价机体血脂水平的关键指标[16]。本研究结果显示，大鼠给予阿昔莫司后可以显著改善高脂饲料喂养导致的大鼠TC、TG水平升高，当联合氯吡格雷给药后，大鼠血脂水平与模型组比较，差异有统计学意义，且TG水平与阿昔莫司组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。血清TC与动脉粥样硬化、冠心病、脑卒中等心脑血管疾病关系密切，而机体中的脂蛋白分为LDL及HDL，其中LDL和TC结合而成的LDL-C，是导致动脉硬化的关键因素，而HDL和TC结合形成HDL-C，可将TC从组织转移到肝脏中去，具有防治动脉粥样硬化的作用[17-18]。实验结果显示阿昔莫司可以降低血脂LDL-C水平，同时升高HDL-C水平，具有显著的保护作用，而联合氯吡格雷后，相较于单一给予阿昔莫司可以进一步降低机体LDL-C水平。

血脂水平与血液流变学具有一定相关性[19-20]，血液流变学实验检测显示阿昔莫司可以显著改善高脂饲料喂养导致的小鼠血液流变学指标变化，明显降低全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数，同时合用氯吡格雷后大鼠全血黏度指标（切变率5和1）、血浆黏度及红细胞聚集指数较单一应用阿昔莫司有显著性差异。高血脂可以导致血管中炎性因子的释放[21-22]，本研究显示给予阿昔莫司后，大鼠血清炎性因子水平显著降低，同时阿昔莫司与氯吡格雷联合使用后，可以进一步降低TNF-α、IL-6水平。通过超声检测表明阿昔莫司发挥显著改善颈动脉损伤的作用，可以明显降低IMT、MT，合并氯吡格雷后可以进一步降低大鼠MT。

本研究结果显示，阿昔莫司具有显著改善大鼠血脂，及改善大鼠颈动脉损伤的作用，而合并氯吡格雷后可以进一步提高其保护作用。氯吡格雷为血小板聚集抑制剂，对血脂没有显著的临床改善作用。目前美国及欧洲心血管疾病的诊疗指南中已将该药物用于急性冠心病患者的治疗用药，与他汀类合用用于患者血脂的调节，但是目前该药物与他汀类合用的作用机制尚不清楚，本研究结果提示其与阿昔莫司联合使用也显著升高阿昔莫司对血脂的调节作用，但两药合用改善大鼠颈动脉损伤的分子机制还有待进一步探究。

[参考文献]

[1]  Oikonomou E，Siasos G，Tousoulis D. Atherogenesis and hyperlipidemia a notstraightforward association：We really need a novel biomarker？ [J]. Int J Cardiol，2016，202：586-588.

[2]  Xi B，Liu F，Hao Y，et al. The growing burden of cardiovascular diseases in China[J]. Int J Cardiol，2014，174（3）：736-737.

[3]  Kowalczyk E，Krzesiński P，Kura M，et al. Anthocyanins in medicine [J]. Pol J Pharmacol，2003，55（5）：699-702.

[4]  李思源，周杰，張鸥，等.冠状动脉钙化的影响因素[J].中华老年多器官疾病杂志，2018，17（3）：228-232.

[5]  安冬青，吴宗贵，梁春，等.血脂异常中西医结合诊疗专家共识[J].中国全科医学，2017，20（3）：262-269.

[6]  邓兰兰，潘玉华，冯金玉，等.颈动脉粥样硬化与血压及血脂的相关性分析[J].中国继续医学教育，2017，9（4）：129-131.

[7]  Casanova F，Wood AR，Yaghootkar H，et al. A Mendelian Randomization Study Provides Evidence that Adiposity and Dyslipidemia Lead to Lower Urinary Albumin Creatinine Ratio，a Marker of Microvascular Function [J]. Diabetes，2020，69（5）：1072-1082.