李鑫娜 申辛欣 王瑞白 段素霞 张瑞卿 王瑞欢 白雪丁 凡国豪 王金荣 高源 陈子巍 马学军

利福平作为一线抗结核药物，主要通过与细菌的RNA聚合酶的β亚单位结合，干扰细菌的RNA转录，从而发挥杀菌作用。编码RNA聚合酶β亚单位的基因(rpoB基因)中有一段长81 bp的利福平耐药决定区(rifampin resistance-determining region, RRDR；密码子507～533，共27个氨基酸)，超过95%的利福平耐药MTB菌株在该区域内发生突变，而密码子516、526和531是最常见的突变位点[1]。

目前，核酸检测技术更迭迅速，使得MTB分子生物学药物敏感性试验(简称“药敏试验”)技术发展迅速，例如，聚合酶链反应-单链构象多态性方法(PCR-SSCP)[2]、荧光定量PCR方法[3]、高分辨率熔解曲线法[4-5]、反向探针杂交方法[6]、基因芯片技术[7-8]等。这些方法和技术虽结果准确，但需要专业人员进行操作，且实验对仪器设备依赖性较高，需要高精密仪器。重组酶介导等温扩增法(recombinase aided amplification, RAA)是一种适合现场和基层的等温核酸扩增方法。该方法操作简便，可利用便携式仪器快速进行病原微生物检测[9-10]。笔者实验室曾建立探针导向的重组酶介导的等温扩增法(probe-directed recombinase amplification，PDRA)，并成功应用于5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)A1298C的单核苷酸多态性(SNP)位点检测[11]。本研究中，笔者拟探究采用PDRA方法检测MTB的rpoB基因516位点突变的应用价值。

材料和方法

1.菌株来源：6株MTB利福平耐药菌株、35份MTB培养阳性的痰标本均来自中国疾病预防控制中心传染病所结核病室。

2.细菌基因组制备：采用十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)方法进行细菌基因组提取[12]。方法简述如下：80 ℃灭活30 min，离心弃上清，菌体沉淀用400 μl TE缓冲液旋起，加入溶菌酶，37 ℃孵育16～20 h。……