赵永成 于薇 任可馨 付微 梁军

【摘要】目的 探讨NRG1可否促进Whartons jelly间充质干细胞表达VEGF。方法 提取人脐带Whartons jelly间充质干细胞;细胞分未转染组和转染组;NRG1转染三天后，ELISA方法检测上清液中VEGF的含量，免疫荧光方法检测细胞中VEGF的表达。结果 转染组上清液中VEGF的含量和免疫荧光阳性率与未转染组的比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 NRG1可促进Whartons jelly间充质干细胞表达VEGF。

【关键词】Whartons jelly间充质干细胞;神经调节蛋白1;血管内皮生长因子

【中图分类号】R329 【文献标志码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.9..02

脐带Whartons jelly间充质干细胞（Whartons jelly mesenchymal stem cells，WJMSCs）被认为是理想的干细胞源[1]。但移植的细胞存在存活率低的问题。神经调节蛋白1（neuregulin-1，NRG-1）属于生长和分化因子家族，可参与血管新生[2]。在体外，BMP4可否通过上调WJMSCs表达血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF），进而促进血管新生改善细胞生存环境，未查见相关报道。

1 材料与方法

1.1  材料

人脐带（牡丹江红旗医院）;FBS、DMEM培养基（Hyclone）;NRG-1质粒（牡丹江医学院干细胞研究所）;ELISA试剂盒（Takara）;VEGF抗體（Sigma）。

1.2  方法

1.2.1 细胞提取

取剖腹产脐带，剪成直径约0.3 cm的组织块，用10% FBS-DMEM培养液培养组织块;每2 d换液一次;细胞融合至90%时传代。

1.2.2 实验分组

实验分为转染组和未转染组。

1.2.3 细胞转染

取第三代细胞，按Lipofectamine TM 2000说明书把VEGF质粒转染细胞。细胞转染3天后，进行VEGF检测。

1.2.4 ELISA检测

按ELISA试剂盒说明书检测上清液中VEGF的含量。用酶标仪在450 nm波长下检测样本OD值。

1.2.5 免疫荧光检测

4%多聚甲醛固定15 min后1%牛血清白蛋白封闭25 min;VEGF抗体孵育100 min;二抗孵育50 min;DAPI复染15 min。阳性率=红色荧光数/蓝色荧光数×100%。

1.3  统计学方法

统计分析采用SPSS 13.0软件，计量数据以x±s表示，组间比较采用单因素方差，差异显著的判断标准为P<0.05。

2 结 果