赵永成 于薇 任可馨 付微 梁军

【摘要】目的 探讨NRG1可否促进Whartons jelly间充质干细胞表达VEGF。方法 提取人脐带Whartons jelly间充质干细胞;细胞分未转染组和转染组;NRG1转染三天后，ELISA方法检测上清液中VEGF的含量，免疫荧光方法检测细胞中VEGF的表达。结果 转染组上清液中VEGF的含量和免疫荧光阳性率与未转染组的比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 NRG1可促进Whartons jelly间充质干细胞表达VEGF。

【关键词】Whartons jelly间充质干细胞;神经调节蛋白1;血管内皮生长因子

【中图分类号】R329 【文献标志码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.9..02

脐带Whartons jelly间充质干细胞（Whartons jelly mesenchymal stem cells，WJMSCs）被认为是理想的干细胞源[1]。但移植的细胞存在存活率低的问题。神经调节蛋白1（neuregulin-1，NRG-1）属于生长和分化因子家族，可参与血管新生[2]。在体外，BMP4可否通过上调WJMSCs表达血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF），进而促进血管新生改善细胞生存环境，未查见相关报道。

1 材料与方法

1.1  材料

人脐带（牡丹江红旗医院）;FBS、DMEM培养基（Hyclone）;NRG-1质粒（牡丹江医学院干细胞研究所）;ELISA试剂盒（Takara）;VEGF抗體（Sigma）。

1.2  方法

1.2.1 细胞提取

取剖腹产脐带，剪成直径约0.3 cm的组织块，用10% FBS-DMEM培养液培养组织块;每2 d换液一次;细胞融合至90%时传代。

1.2.2 实验分组

实验分为转染组和未转染组。

1.2.3 细胞转染

取第三代细胞，按Lipofectamine TM 2000说明书把VEGF质粒转染细胞。细胞转染3天后，进行VEGF检测。

1.2.4 ELISA检测

按ELISA试剂盒说明书检测上清液中VEGF的含量。用酶标仪在450 nm波长下检测样本OD值。

1.2.5 免疫荧光检测

4%多聚甲醛固定15 min后1%牛血清白蛋白封闭25 min;VEGF抗体孵育100 min;二抗孵育50 min;DAPI复染15 min。阳性率=红色荧光数/蓝色荧光数×100%。

1.3  统计学方法

统计分析采用SPSS 13.0软件，计量数据以x±s表示，组间比较采用单因素方差，差异显著的判断标准为P<0.05。

2 结 果

2.1  ELISA检测结果

如表1所示，转染组上清液VEGF的含量与对照组的比较，具有统计学意义。

2.2  免疫荧光检测结果

阳性细胞的胞质和突起呈红色荧光;经非特异性染色的细胞核呈蓝色荧光（图1）。转染组的阳性细胞表达率与对照组的比较，具有统计学意义（表2）。

3 讨 论

NRG1可促进多种细胞表达VEGF。NRG1可使发育的心肌增强VEGF的表达 [3];还能增加VEGF在人冠状动脉平滑肌细胞中的表达[4]。在病理情况下，结肠癌患者的活检标本中，NRG1与VEGF表达呈正相关[5]。本研究发现，NRG1可促进WJMSCs表达VEGF。这些研究结果表明，NRG1可调控VEGF的表达，进而参与增生、抗凋亡和血管新生等多种生物学过程。

NRG1的配体是酪氨酸激酶（Erythroblastic leukemia viral oncogene homologs，ErbB）受体。NRG1∕ErbB信号不仅通过促VEGF表达途径[5]，还可通过直接作用血管内皮[2]和血管平滑肌[6]途径促进血管新生。

参考文献

[1] Dinesh B，Sharath BS，Park JK，et al.Comparative analysis of human Whartons jelly mesenchymal stem cells derived from different parts of the same umbilical cord [J].Cell Tissue Res，2018，372（1）：51-65.

[2] Alberto O，Laura DG，Azucena EO，et al. Neuregulin expression in solid tumors： Prognostic value and predictive role to anti-HER3 therapies [J]. Oncotarget，2016，7（29）：45042-45051.

[3] Wadugu B，Kühn B.The role of neuregulin/ErbB2 /ErbB4 signaling in the heart with special focus on effects on cardiomyocyte proliferation [J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2012，302（11）：2143-2147.

[4] 庞毅恒，桂   春，陈力铨.神经调理蛋白1对冠状动脉平滑肌细胞表达血管生成因子的影响[J].中国病理生理杂志，2016，32（11）：1945-1948.

[5] Yonezawa M，Wada K，Tatsuguchi A，et al.Heregulin-induced VEGF expression via the ErbB3 signaling pathway in colon cancer [J].Digestion，2009，80（4）：215-225.

[6] Clement CM，Thomas LK，Mou Y，et al.Neuregulin-1 attenuates neointimal formation  following vascular injury and inhibits the proliferation of vascular smooth muscle cells [J].J Vascular Res，2007，44（4）：303-312.

作者简介：赵永成（1984年-），男，牡丹江医学院在读硕士，研究方向：干细胞分化机制及临床应用的实验研究

通讯作者：梁 军（1972年-），男，博士，教授，牡丹江干细胞研究所所长，

研究方向：干细胞分化机制及临床应用的实验研究