杨恒强

（江苏省苏州市动物园 215009）

弓形虫是一种寄生虫感染疾病，属于人畜共患病，因此不仅影响了动物的正常生长，也对人类的健康产生了严重的威胁。弓形虫属球虫亚纲，弓形体属，细胞内寄生虫，中间宿主包括鸟类、昆虫类、爬虫类、鱼类以及哺乳动物，最终宿主为猫科动物。弓形虫在细胞内寄生，随着细胞在血液中流动，弓形虫也会到达宿主体内的各处部位，并对机体组织进行破坏，最终导致宿主的免疫机能下降，患病率增高，发病率增高[1]。动物园中的野生动物为圈养的饲养模式，容易造成弓形虫病的传播扩散，因此，开展圈养野生动物弓形虫感染情况调查的意义重大。对于圈养野生动物弓形虫病调查与研究的主要内容，包括感染情况、弓形虫毒力分析等，详尽的研究报告能够为圈养野生动物弓形虫病的综合防治措施起到了一定的指导意义，最大限度地降低了弓形虫病对圈养野生动物的危害。

1 研究圈养野生动物弓形虫感染的意义

现阶段国内动物园的总数量大约在200 家左右，但对圈养野生动物感染弓形虫方面的研究尚不完善，据不完全统计报道，国内北京、上海、成都、福州等城市均有不同程度的圈养野生动物受到弓形虫感染，甚至黑龙江的东北虎养殖基地、成都的大熊猫繁殖基地都曾发现过弓形虫感染的情况。由于多家动物园甚至是重点动物保护区都发生过弓形虫感染的案例，并且野生动物受到弓形虫感染后多数为慢性感染，从体态症状上没有明显异常症状，但随着慢性感染时间的递增，弓形虫在野生动物体内大量繁殖，会造成严重的危害。在慢性感染阶段由于没有明显患病症状，针对弓形虫感染方面的诊断难度倍增，这也是弓形虫在圈养区域大面积传染的原因[2]。针对圈养野生动物弓形虫感染的现状，为保证圈养野生动物的健康安全，确保野生动物在圈养区域健康生长，对圈养野生动物弓形虫感染的研究迫在眉睫。

2 试验与方法

2.1 试验设计

本次试验时间为2017 年6 月～2019 年6 月，在动物园采集血液样本，使用间接酶联免疫试验法检测样本野生动物的弓形虫感染情况，样本包含30 种野生动物共120 份血液样本，其中哺乳纲食草动物60 份、食肉动物40 份、灵长类动物5 份、禽类动物15 份（参见附图）。采集到的血液样品要置于-20℃的恒温冰箱中保存待用。

2.2 试验方法

附图 各品种样本数量

采集圈养野生动物的血液样本，并做好标记序号，使用空白96 孔板对样本进行稀释，稀释比例按照1：10 进行。使用蒸馏水将浓缩洗涤剂稀释，稀释倍数为1:20 倍数，制成稀释洗涤剂，然后进行洗涤液的准备，按照每份样本每次洗板300ml的计量，进行2 次洗板共计需要600ml 的稀释液，根据样本的数量进行合理的配比，避免过量浪费。然后将样本置于21℃恒温下培养45min 后，进行洗板处理，一共需要经过3 次洗板，在此过程中动作要慢避免稀释液流速过快造成孔板上的实验样本受损，影响实验效果。同时需要注意的是，在最后一次进行洗涤液冲洗后，需要将剩余的稀释液用卫生棉吸去，使用连续加液器加液。然后再次对样本进行培养，培养温度保持在16～26℃，持续30min，进行第二次洗板，同样进行3 次。随后在孔板的每个孔内加入底物，继续进行培养15min，加入终止液。使用酶标仪读取培养物波长，进行数据分析，使用450nm 的波长进行检测，分别记录。将酶标仪记录的数据进行计算，计算每组样本的S/P 值，若S/P 值＞50%，则结果为阳性；若S/P值≤40%则为阳性；若S/P 值非两者，处于两者之间，则结果仍存疑。

3 结果及分析

由附表可知，本次试验检测的120 份野生动物血液样本中，总体弓形虫阳性率为23.3% (28/120)，其中食草性动物弓形虫阳性率最高，达到了35.0% (21/60)，食肉性动物弓形虫阳性率为15.0% (6/40)，灵长类动物弓形虫阳性率为20.0% (1/5)，禽类动物未检测到阳性抗体(0/15)。

4 讨论与分析

4.1 结果分析

通常野生动物在感染了弓形虫1～2 周后，检测结果显示为阳性，感染3～5 周后抗体效价会达到峰值，并且在很长的一段时间内保持不变。目前针对野生动物弓形虫抗体的检测，主要采取凝集检测法(MAT)、间接红细胞凝集检测法(IHAT) 和酶联免疫吸附实验检测法(ELISA) 等[3]。张述义等[4]在2001 年对凝集检测法(MAT)、间接红细胞凝集检测法(IHAT) 和酶联免疫吸附实验检测法(ELISA) 3 种检测方法的阳性检出率进行了对比试验，试验结果显示，3 种检测方法得到的结果无显著差异，均适用于野生动物弓形虫感染的流行病学调查。

在本次试验中，使用的检测方法是酶联免疫吸附实验检测法(ELISA)，检测结果显示动物园中120 份野生动物的血液样本阳性率为23.3%。其中，食草性野生动物的感染率最高，为35.0%，这可能与动物园的布局有关，食草性野生动物的场馆通常为半开放式，没有设置隔离网等设施，与外界接触的频率较高，而且动物园周围有流浪猫的存在，这种半开放式的布局对流浪猫没有防护作用，时常有流浪猫在食草性野生动物区域活动，而弓形虫是猫的常见病，且猫科动物是弓形虫的终宿主，流浪猫没有经过驱虫处理，极易携带弓形虫，通过粪便使弓形虫在动物园中传播，草食性动物误食含有弓形虫卵囊的粪便而发生感染。根据资料显示，动物园附近流浪猫弓形虫的抗体阳性率高达50%。对于禽类弓形虫感染的检测，不同的地区，不同动物园内的结果差异较大，本次试验中，采集了15各血液样本对禽类野生动物弓形虫感染情况进行检测，未发现有阳性禽类动物，出现此检测结果的主要原因可能是采集的样本为弓形虫的不易感物种，且检测数量较少，未辐射大多数的禽类野生动物。

附表 野生动物弓形虫血清学抗体检测结果

4.2 讨论

根据本次试验可知，动物园内野生动物感染弓形虫的阳性率并不低，在日常的饲养中，需要加以防控，首先要控制流浪猫的数量，优化动物园内的布局，减少流浪猫与野生动物的接触，同时，对于检测结果为阳性的野生动物，要采取驱虫的措施，减少动物园内的感染数量，加强消毒管理，切断弓形虫的传播途径，保证野生动物的安全与健康[5]。感染过弓形虫的动物即使经过治疗也容易成为隐性带虫动物，危害动物园中其他野生动物的健康，所以，预防动物园中的交叉感染以及重复感染是防控的关键[6]。