王敏，李明俊

（1.广东茂名农林科技职业学院广东茂名 525000；2.广东茂名农林科技职业学院广东茂名 525000）

1 我国部分地区猪弓形虫流行病学

从1977 年猪弓形虫病被报道至今，我国关于猪弓形虫病研究已经过去40 多年。整理我国部分地区猪弓形虫病流行病学调查资料，分析如下：①我国猪弓形虫感染情况较为普遍，全国猪弓形虫平均感染率为40%左右，大部分省份弓形虫感染率为20%～45%，弓形虫感染情况最严重的为重庆地区，为75.94%，感染率最低是西藏地区，为5.1%[1-7]；②在我国，猪弓形虫感染情况较为严重地区主要分布在沿海亚热带地区，而在相对寒冷且干燥的地区猪弓形虫感染率则低。如西藏地区藏猪弓形虫感染仅为5.1%；③猪弓形虫感染还与猪场的饲养方式和猪自身免疫情况有关，散户猪场感染率高于规模化养猪场，经产母猪产胎次数越多弓形虫感染率越高，并且可能多次反复感染弓形虫。

2 临床症状

猪弓形虫急性感染主要表现为：稽留热，体温为40～42℃，精神沉郁甚至食欲废绝，便秘与腹泻交替出现，其耳后和腹下部出现血斑，并伴有腹股沟淋巴结肿大，持续时间大概7～10d。若感染猪能挺过这段时间，其食欲和体温逐渐恢复正常，弓形虫在其肌肉、脑部等形成包囊，转化为慢性感染，若机体免疫系统受损，则再次出现急性感染症状。一般免疫力正常的猪感染弓形虫无明显症状，呈慢性感染，当猪弓形虫感染呈急性症状时常引起死亡[8]。

3 猪弓形虫病临床诊断技术

3.1 弓形虫病诊断技术概述

猪弓形虫感染诊断技术主要分为3 类：①弓形虫病原检测，如取检测猪的血液、组织液进行涂片，以是否观察到弓形虫虫体作为诊断依据，或者从疑似弓形虫感染的猪取淋巴结等组织进行处理，然后感染小鼠，对感染小鼠进行追踪观察，并取有明显症状的腹水或脑组织进行涂片，以是否观察到弓形虫虫体或脑包囊作为诊断依据；②弓形虫分子生物学诊断，主要以是否扩增到弓形虫特异性片段为诊断依据。如传统PCR 扩增弓形虫529bp，巢式PCR 检测弓形虫P30 基因，若两者扩增结果均为阳性，则基本可判断为该猪已感染弓形虫；③弓形虫免疫学诊断，主要以是否检测到抗弓形虫抗体或抗原作为诊断依据，常用方法有IFA、IHA、MAT、ELISA 和GICA。

3.2 常用弓形虫感染诊断方法优点与缺点分析

①弓形虫虫体诊断，优点：准确；缺点：诊断时间长、需要饲养实验动物、对诊断环境和诊断人员技术有严格要求；适用对象：实验室研究；②弓形虫分子生物学诊断，优点：特异性高、灵敏度高、诊断方法种类多样；缺点：需要费用高昂的仪器和标准的实验环境、对诊断人员技术有严格要求；适用对象：一般用于实验室研究；③弓形虫免疫学诊断，优点：可批量检测、对诊断环境和诊断人员要求相对较低、操作相对简单；缺点：特异性不及弓形虫虫体诊断，灵敏度不及分子生物学诊断；适用对象：一般用于临床诊断[9]。

3.3 临床常用诊断方法概述

IHA，间接血凝试验的简称，英文全名为：indirect hemagglutination test，1957 年Jacob 和Lunde 率先用于检测弓形虫感染，1994 年曾为国际认定的弓形虫诊断方法两种之一，其优点：价格合理、特异性强且操作方便。实验主要通过红细胞吸附弓形虫特异性抗原，检测血清中有抗弓形虫抗体，若红细胞不稳定，易出现假阳性，且重复性差，临床应用发现敏感性不及ELISA[10]。

MAT，改良凝集试验的简称，英文全名为：modified agglutination test，是其他国家用于猪弓形虫感染诊断使用较多的诊断方法[11]。与ELISA、IHA 和LAT 一并，四种方法检测同样猪血清，结果显示MAT 的敏感性最高[12]。利用MAT 检测仔猪弓形虫、蠕虫和病毒感染阳性血清，结果显示：无交叉感染，该方法的特异性较高[13]。但由于成本较高，最终没有被广泛推广。

ELISA，间接酶联免疫吸附试验的简称，英文全名：enzyme-linked immunosorbent assay，1976 年Voller 首次用于弓形虫诊断，是我国近20 年猪弓形虫病诊断使用最多的诊断方法，检测内容为猪抗弓形虫IgG。优点：诊断时间较短、特异性高、灵敏性高、重复性好、检测内容灵活、可批量检测、操作可程序化，有望实现工业化检测，是理想的临床检测方法。

GICA，为胶体金免疫层析技术的简称，英文全名为：colloidal gold immunochromatography assay。报道显示：已制备的以弓形虫分泌抗原为检测对象的胶体金试纸条，敏感性高，与IHA 符合率为82.4%[14]。Huang 等用胶体金与重组融合蛋白吸附，制备金标试纸条，用于检测猫弓形虫抗体，结果显示该实验的敏感性达100%，特异性达94.5%[15]。2010 年李聪颖制备的可用于山羊弓形虫病检测的试纸条，结果显示：样品检测与ELISA 检测结果符合率为85%[16]。胶体金免疫层析技术操作简单、携带方便、检测过程短，是临床检测中理想检测方法。

4 弓形虫病诊断方法的发展现状

4.1 弓形虫病诊断方法常用诊断抗原

临床上弓形虫病诊断方法主要是以弓形虫全虫蛋白或弓形虫分泌蛋白为诊断抗原，检测动物体内抗弓形虫抗体，或者制备弓形虫分泌抗原重组蛋白的抗体检测动物体内的弓形虫抗原，目前文献报道主要有基于弓形虫MIC3、SAG1、SAG2、SAG3、GRA6、GRA7、BAG1 等基因型检测方法的研究，但普遍都存在特异性和敏感性不够理想的问题[17]。

4.2 目前弓形虫病诊断方法的不足与可能的改进措施

以猪弓形虫病诊断试剂盒为例：①抗体检测对象均为IgG 抗体，而IgG 抗体检测临床价值不突出，检测猪抗IgM 抗体作为诊断依据效果更为理想。猪感染弓形虫，一般在7d 左右出现抗弓形虫IgM 抗体，并逐渐升高至顶峰，在2 个月左右消失，而抗弓形虫IgG 抗体则在1 月后出现，一般可以维持1 年以上。一般可根据猪血清中是否含抗弓形虫IgM 抗体结果，判定该猪是否在近期感染弓形虫，而抗弓形虫IgG 抗体存在时间长，检测抗弓形虫IgG 抗体可作为弓形虫病流行病学调查研究依据，但作为药物防治的指导意义不大；②可尝试猪弓形虫抗IgM 抗体和弓形虫抗原联合检测进行判断，IgM 是感染初期产生的抗体，一般可作为早期诊断依据，IgG 抗体产生时间晚于IgM 的主要抗体[18]，而弓形虫分泌抗原的出现则提示极有可能是急性感染，因此抗原与IgM 抗体检测联合使用具有较好的临床诊断价值。■