覃日宏，应雨绮，李周东，林胜深，李宣锦，高鑫

（广西中医药大学赛恩斯新医药学院，广西 南宁）

0 引言

毛果算盘子为大戟科植物毛果算盘子(Glochidioneriocarpum Champ.) 的干燥地上部分，该植物在广西资源丰富，分布广泛，其主治清热利湿，散瘀消肿，解毒止痒；用于治疗生漆过敏，水田皮炎，皮肤瘙痒，荨麻疹，湿疹，剥脱性皮炎，跌打损伤[1-2]，目前，对毛果算盘子的抗炎研究已有所报道[3]，但是关于其不同提取部位的抗炎作用的研究及筛选尚未见报道，研究中药不同部位的药效是中医药研发的一个新思路。本文对毛果算盘子不同极性部位的抗炎作用进行体外给药进行研究，确定有效极性部位，为其进一步开发及临床应用提供有效依据。

1 实验药材与方法

1.1 仪器

AUY220 电子天平（日本岛津）、RE-52AA 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

1.2 试剂

二甲苯（国药集团化学试剂有限公司，批号：20170601）、卡拉胶（如吉生物科技，批号：190110）、石油醚（广东光华科技股份有限公司，批号：20140319）、乙酸乙酯（西陇科学，批号：120702-1）、正丁醇（上海申博有限公司，批号：1406101）、丙二醇（西陇科学，批号：180102-1）、吐温-80（西陇科学，批号：170305）、复方醋酸曲安奈德溶液（广东恒诚有限公司，批号：1904401）、甲醇（西陇科学，批号：190104-1）。

1.3 动物

小鼠为昆明种，SPF 级，20±2g（由长沙市天勤生物技术有限公司提供），许可证号：SCXK（2014-0011）♂。

1.4 药材

毛果算盘子药材采自广西隆林，经广西中医药大学赛恩斯新医药学院苑敏副教授鉴定，为大戟科植物毛果算盘子(Glochidioneriocarpum Champ.) 的干燥地上部分。毛果算盘子提取工艺：取毛果算盘子1kg 干燥地上部分处理成约0.5cm 小段，置回流装置中加70%乙醇浸泡30min，加热回流60min，过滤，取滤液，滤渣加70%乙醇继续回流提取30min，过滤，取滤液，合并两次滤液，减压浓缩至无醇味后加适当的水使成混悬液，依次用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，剩下部位为水部位，将萃取液减压浓缩后至水域浓缩成膏状，分别得乙酸乙酯部位（A1）、正丁醇部位（A2）、水部位（A3），置-20℃冰箱中保存，备用。临用前配制成相应的浓度，每个溶液均内含体积分数为7.0% 的药用丙二醇，作透皮吸收、含浸膏分别8% 聚山梨酯-80 助溶。

1.5 实验方法

1.5.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

取小白鼠（♂）80 只，放置实验环境适应3 天，体重18～22g，随机分成8 个组：复方醋酸曲安奈德溶液组，生理盐水对照组，A1、A2、A3 高、低剂量组（相当于原药材相当于原药材1.2g/mL、0.6g/mL）。8 组小鼠均用微量移液器移取二甲苯，分别在右耳廓前后两面均匀凃抹二甲苯致炎(0.04mL/ 只)，致炎0.5、1、2 小时后，8 组小鼠分别用相应浓度的药物在右耳廓涂药，用药量为4mL/kg，模型组同时凃抹相同剂量的生理盐水，4 小时后将6 组小鼠颈椎脱臼处死，逐只剪下双耳，用8mm 打孔器分别在左右耳相同部位打下耳片，在电子分析天平称重，以两耳片的重量差为炎症肿胀度，并计算肿胀抑制率。肿胀度=右耳重量(mg)－左耳重量(mg)；肿胀抑制率(%)=[( 模型组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/ 模型组平均肿胀度×100%。

1.5.2 对角卡拉胶致小鼠足肿胀的影响

取小白鼠（♂）80 只，放置实验环境适应3 天，体重18～22g，随机分成8 个组：复方醋酸曲安奈德溶液组，生理盐水对照组，A1、A2、A3 高、低剂量组（相当于原药材相当于原药材1.2g/mL、0.6g/0）。实验者手抓小鼠将右后足跖放于药液中浸泡180s，模型组浸泡于纯净水中。给药后60min 小鼠右后足跖腱膜下缓慢注射1%卡拉胶(用生理盐水配制)0.02mL/只致炎，致炎后1h、2h 后用前面同样方法再分别给药2 次，致炎3h 后脱颈椎处死各小鼠，于膝关节处剪下两后足，分别称左、右足重量，右后足减左后足重量的差值即为肿胀度；作t 检验，比较药物与对照组之间的差异。肿胀抑制率(%)=[( 模型组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/ 模型组平均肿胀度×100%。

2 实验结果

2.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响与空白对照组相比，A2高、低剂量对二甲苯所引起的小鼠耳肿胀均有显著的抑制作用（P＜0.05），抑制率22.55%、17.67%，结果见表1。

2.2 对卡拉胶致小鼠足肿胀的影响与空白对照组相比，A3 高、低剂量，A2 高剂量、对1% 卡拉胶所引起小鼠足肿胀都有显著的抑制作用（P＜0.05），抑制率分别为44.98%、44.10%、28.38%。结果见表2。

表1 GEH 对二甲苯至小鼠耳肿胀的影响（，n=10）

表1 GEH 对二甲苯至小鼠耳肿胀的影响（，n=10）

注：与空白组对比：* P＜0.05，** P＜0.01,***P＜0.001

组别 剂量（g/mL） 肿胀度（g） 抑制率（%）NS 对照组 — 0.0168±0.0025 —复方醋酸曲安奈德溶液组 原液 0.0114±0.0054* 32.06 A1 高剂量组 1.2 0.0148±0.0051 12.08 A1 低剂量组 0.6 0.0154±0.0031 8.69 A2 高剂量组 1.2 0.0130±0.0041* 22.55 A2 低剂量组 0.6 0.0138±0.0022* 17.67 A3 高剂量组 1.2 0.0164±0.0055 2.38 A3 低剂量组 0.6 0.0168±0.0013 0.24

表2 GEH 对1%卡拉胶胶致小鼠足肿胀的影响n=10）

表2 GEH 对1%卡拉胶胶致小鼠足肿胀的影响n=10）

注：与空白组对比：* P＜0.05，** P＜0.01,***P＜0.001

组别 剂量（g/mL） 肿胀度（g） 抑制率（%）NS 对照组 — 0.0229±0.0077 —复方醋酸曲安奈德溶液组 原液 0.0128±0.0064** 44.10 A1 高剂量组 1.2 0.0212±0.0047 7.42 A1 低剂量组 0.6 0.0189±0.0084 17.47 A2 高剂量组 1.2 0.0164±0.0044* 28.38 A2 低剂量组 0.6 0.0169±0.0148 26.20 A3 高剂量组 1.2 0.0126±0.0081** 44.98 A3 低剂量组 0.6 0.0128±0.0067** 44.10

3 讨论

炎症初期以毛细血管扩张、通透性增加、组织液渗出和水肿为特征，急性期以局部血管扩张、通透性继续增加为特征。化学致炎剂二甲苯可引起组胺激肽、纤维蛋白溶解酶等炎性介质释放， 进而引起局部毛细血管通透性增加及炎症细胞浸润， 最终引发耳部急性渗出性炎性水肿[4]；具有刺激性的角叉菜胶注入大鼠足跖后，可使大鼠的足跖局部毛细血管充血、水肿， 引发足跖体积增加， 同时伴有红、肿、热、痛等症状[5]。

本实验采用70%乙醇提取毛果算盘子的有效成分，依次用石油醚（石油醚无萃取物，因此不做为抗炎活性筛选部位）、乙酸乙酯、正丁醇三种溶剂进行萃取，剩余部位作为水部位；用传统的1%卡拉胶致小鼠脚肿胀、二甲苯致小鼠耳廓肿胀观察毛果算盘子不同极性部位对小鼠的抗炎作用，结果显示水部位和正丁醇高剂量对1%卡拉胶致小鼠脚肿胀具有明显的抑制作用，正丁醇高、低剂量二甲苯致小鼠耳廓肿胀具有明显的抑制作用，而乙酸乙酯部位则无抑制作用。

本实验验证了毛果算盘子不同极性部位的体外抗炎作用，中药成分十分复杂，抗炎机制也十分复杂，具有多靶点、多途径、多环节的特点，本次试验对不同药用部位的提取物进行分离单独测其抗炎镇痛作用， 虽然不能确定是其中某个单体发挥抗炎镇痛作用，但初步确定不毛果算盘子的有效极性部位，为其进一步开发及临床应用提供有效依据，但其不同部位的抗炎机制尚未明确，尚须进一步从因子水平等进行研究才能更全面更深层次的阐明其抗炎机制。