马丽霞 高玉娟 刘晓慧 张晶

肝细胞凋亡参与了多种急慢性肝脏疾病的发生、发展过程，如病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、胆汁淤积性肝病和肝脏缺血-再灌注损伤等，是肝细胞损伤的重要机制之一[1-2]。体内和体外实验发现， Fas配体、肿瘤坏死因子-ɑ、放线菌D(actinomycin D，AcD)、干扰素、四氯化碳等常见的肝毒性药物可诱导肝细胞发生凋亡[3]。随着研究的深入，相继发现N-乙酰半胱氨酸、蛋白水解酶抑制剂、角质细胞生长因子等，可抑制肝细胞凋亡的发生[4-5]，但其作用机制尚未完全阐明，且临床应用还很少。5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)作为一种神经递质的小单胺分子，对肝脏的病理生理起着至关重要的作用，它可以促进多种啮齿动物部分肝切除术后的肝脏再生，促进缺血/再灌注损伤后的肝组织修复[6，7]。研究发现，5-HT还能够通过抑制小鼠肝细胞凋亡，改善对乙酰氨基酚诱导的肝损伤[8]。肝细胞损伤与细胞凋亡的关系非常密切。到目前为止，5-HT在AcD诱导的肝细胞凋亡过程中的作用尚不清楚。本研究探讨5-HT在AcD诱导的肝细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制，为临床应用5-HT制剂治疗肝脏疾病提供依据。

材料与方法

一、细胞、材料和试剂

人肝癌细胞系HepG2细胞和正常细胞系7702细胞(美国ATCC公司)；DMEM培养基、1640培养基和胎牛血清(美国Hyclone公司)，AcD、5-HT、MTT工作液(美国Sigma公司)，5-HT 2A受体激动剂2，5-二甲氧基4一碘苯基丙烷(2，5-dimethoxy 4-iodophenyl- 2-aminopropane，DOI)、5-HT 2B受体激动剂α-甲基血清素马来酸盐(α-Methylser otoninmal- eate salt，M110)、5-HT 2B受体拮抗剂N-1-甲基-5-吲哚基-5-三唑基(N-1-methyl-5-indolyl -5-isothazolyl urea，SB204)(美国Sigma公司)；Annexin V-FITC流式检测试剂盒、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)；……