葡萄皮提取物和维生素C配伍对小鼠免疫力的影响

2019-09-10孔令宁吴雨霏

介入医学杂志（英文） 2019年5期

孔令宁吴雨霏

[摘要] 目的：观察葡萄皮提取物和维生素C配伍对小鼠免疫力的影响。方法：选用ICR小鼠，进行脏器/体重比值测定、迟发型变态反应、刀豆蛋白 A（Con A）诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、抗体生成细胞检测、半数溶血值（HC50）测定、碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和NK细胞活性测定，研究葡萄皮提取物和维生素C配伍是否可以调节免疫功能。结果：葡萄皮提取物和维生素C配伍能增强小鼠的迟发型变态反应，提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数量，还能促进NK细胞的活性。但对小鼠体重、脾脏/体重、胸腺/体重、淋巴细胞增殖能力、抗体生成细胞数、半数溶血值、碳廓清功能无影响。结论：葡萄皮提取物和维生素C配伍具有一定的调节小鼠免疫功能的作用。

[关键词] 葡萄皮提取物;维生素C;免疫

葡萄皮中含有丰富的营养成分，如酚类物质、酒石酸、苹果酸、维生素、葡萄籽油、膳食纤维等。葡萄皮中白藜芦醇含量比较丰富，属于酚类物质。白藜芦醇具有抗肿瘤、降低心血管疾病和糖尿病等医疗保健作用。葡萄皮提取物中还含有丰富的浓缩单宁酸，浓缩单宁酸具有调节免疫力的作用[1-2]。维生素 C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫 L-抗坏血酸，是人体必需的微量营养元素之一，它具有

抗氧化、参与合成胶原蛋白、治疗和预防坏血病、预防动脉硬化、治疗贫血、防癌等多种生理学功能。除此之外，维生素C还能促进机体内抗体的形成，提高白细胞的吞噬能力和对疾病的抵抗力以及对寒冷的耐受力，从而增强机体的免疫功能[3-4]。本实验观察葡萄皮提取物和维生素C混合粉对小鼠免疫的影响。

1 材料

1.1 实验药物

葡萄皮提取物维生素C复合物由实验室自制。葡萄皮提取物（白黎芦醇含量4.8%）比维生素C为12.5：1的比例混合制成混合粉末。

1.2 實验动物

SPF级ICR昆明小鼠，体重（18-22）g，由北京大学医学部实验动物中心提供。

1.5 实验仪器及试剂

二氧化碳培养箱、电子分析天平、台式离心机、分光光度计、酶标仪、游标卡尺、细胞计数板、24孔和96孔细胞培养板、96孔U型细胞培养板等。RPMI1640培养液、小牛血清、、绵阳红细胞（SRBC）、鸡红细胞、刀豆蛋白A（ConA）、Hank’s溶液、印度墨汁碳酸钠等。

2 方法

参考《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中增强免疫力功能检验方法，分别进行迟发型变态反应（DTH）、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化、血清溶血素测定实验、抗体生成细胞检测实验、小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、NK细胞活性测定等项实验，并依照该检验方法的判定标准，判定实验结果。

2.1实验分组共分为四组，每组共60只健康雄性小鼠，再分为4个小组，每小组15只。一组进行迟发型变态反应、脏器/体重比值测定、半数溶血值（HC50）的测定和抗体生成细胞检测;二组进行碳廓清实验;三组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;四组进行实验ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定。

2.2 剂量选择与配制成人推荐摄入量为1.0 g/60kg·BW，以日摄入量的5、10和30倍设置灌胃剂量，即0.083、0.167和0.50 g/kg·BW，各剂量组以纯化水稀释。以纯化水为阴性对照组，各组小鼠灌胃量均为0.2ml/10g，连续灌胃30天后，测各组免疫指标。

2.3数据统计采用SPSS11.5统计软件处理数据，实验结果以均数±标准差（）表示。多组比较采用单因素方差分析，方差齐时，各组间两两比较用LSD法;方差不齐时，各组间两两比较采用Tamhane法。P <0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

3.1 葡萄皮提取物维生素C混合粉对小鼠体重及脏器/体重比值的影响

灌胃给予不同剂量的葡萄皮提取物维生素C混合粉30天，四组实验各剂量组小鼠体重与阴性对照组比较，差异无显著差异（P>0.05），即葡萄皮提取物维生素C混合粉对小鼠体重无影响;各剂量组胸腺/体重比值和脾脏/体重比值与阴性对照组比较，差异无显著性（P>0.05），即葡萄皮提取物维生素C混合粉对小鼠脏器/体重比值无明显影响。

3.2 葡萄皮提取物维生素C混合粉对小鼠细胞免疫功能的影响

灌胃给予不同剂量的葡萄皮提取物维生素C混合粉30天，中、高剂量组足趾肿胀度与阴性对照组比较，差异有显著性（P<0.05）;各剂量组淋巴细胞的增殖能力与阴性对照组比较，差异无显著性（P>0.05）

3.3 葡萄皮提取物维生素C混合粉对体液免疫的影响

灌胃给予不同剂量的葡萄皮提取物维生素C混合粉30天，各剂量组抗体生成细胞数、半数溶血值与阴性对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）;

3.4葡萄皮提取物维生素C混合粉对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

灌胃给予不同剂量的葡萄皮提取物维生素C混合粉30天，各剂量组碳廓清功能与阴性对照组比较，差异无显著性（P>0.05）;不同剂量组小鼠巨噬细胞吞噬噬鸡红细胞的吞噬指数与阴性对照组比较，差异有显著性（P<0.05）。

3.5 葡萄皮提取物维生素C混合粉对小鼠NK细胞活性的影响

灌胃给予不同剂量的葡萄皮提取物维生素C混合粉30天，不同剂量组NK细胞活性与阴性对照组比较，差异有显著性（P<0.05），结果表明葡萄皮提取物维生素C混合粉可激活小鼠NK细胞活性。

4 讨论

机体的免疫反应可分为非特异性免疫反应和特异性免疫反应两种，如果非特异性免疫反应不能抵抗病原体的入侵，将会激发特异性免疫反应。吞噬细胞、T 淋巴细胞、B 淋巴细胞对免疫反应的感应阶段所起的作用依次是对抗原的处理、呈递和识别，其中T 淋巴细胞介导细胞免疫，B淋巴细胞介导体液免疫。

本实验结果提示，葡萄皮提取物维生素C混合粉能增强小鼠的迟发型变态反应，提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数量，还能促进NK细胞的活性。表明葡萄皮提取物维生素C配伍具有一定的调节小鼠免疫功能的作用。

参考文献