曹志伟，陈红英

（西北农林科技大学生命科学学院，陕西 杨凌 712100）

免疫球蛋白（Igs）由B淋巴细胞产生，在脊椎动物的适应性免疫反应中起重要作用。Ig分子由两条重链（IgH）和两条轻链（IgL）通过二硫键连接在一起，抗原结合位点位于IgH和IgL链的可变区。虽然鱼类的免疫系统比较原始，但是，硬骨鱼体内产生的Ig包括IgM[1]、IgD[2-4]和IgT/IgZ[5，6]。在机体内发挥功能的免疫球蛋白主要是IgM[7]，哺乳动物体内的IgM分子主要是以五聚体形式存在，而硬骨鱼的IgM分子主要为四聚体[8]。IgD在体液免疫中发挥重要作用[9，10]，IgT 在粘膜免疫应答中产生[11-13]。

抗体具有高特异性和高亲和力，特异性的抗体已经成为哺乳动物和脊椎动物免疫治疗及免疫学和诊断学的重要工具[14]。迄今已开发出多种针对鱼IgM的单克隆和多克隆抗体，如鲤Cyprinus carpio[15]、日本牙鲆Paralichthysolivaceus[16]和虹鳟Oncorhynchus mykiss[17]，用作这些鱼类的免疫学研究工具。这些抗体可以检测特定鱼的IgM，但是，单独开发用于检测每个物种免疫应答的抗体昂贵且耗时。为了降低成本和时间，本研究克隆和融合表达了鲫和虹鳟IgM的重链基因保守序列，用纯化的融合蛋白制备兔抗血清，获得了能同时用于特异性检测鲫和虹鳟IgM的多克隆抗体。

1 材料与方法

1.1 材料

鲫购自陕西临潼区任留良友育种繁育场，虹鳟购自四川雅安贵特种水产经营部；SanPrep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒、SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒、SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）、透析袋（直径 27mm）、EL-TME显色试剂盒（EL-TMB Chromogenic Reagent kit）和抗生素购自生工生物工程（上海）股份有限公司；……