杨加伟，彭辽天，程小玲

（遵义医科大学a.生物化学教研室；b.细胞生物学教研室，贵州遵义563006）

甲硫氨酸亚砜还原酶（Msr）是催化游离或多肽链中的甲硫氨酸亚砜（Met-O）还原为甲硫氨酸（Met）的一类酶[1，2]。目前报道的Msr可分为三类[3-4]：MsrA、MsrB和fRMsr，其中MsrB和fRMsr分别选择性还原多肽链中的-Met-O和游离的-Met-O；而MsrA则选择性的还原游离或者多肽链中构型的Met-O。手性亚砜是一类含有亚硫酰基（>S=O）官能团的重要有机化合物，是很多药物如质子泵抑制剂埃索美拉唑、血小板粘附抑制剂OPC-29030、钾通道激活剂Aprikalim等的关键组成部分[5-8]。利用生物酶选择性地合成单一构型的手性亚砜是目前的研究热点，但高对映选择性、高活性和高底物耐受的生物酶依然十分匮乏[9-11]。在本论文的前期工作中，项目组从一株假单胞菌中筛选出了一个MsrA基因并命名为MsrA[11，12]。利用MsrA重组蛋白为催化剂，有效实现了在底物浓度高达200mM下-构型亚砜的高特异性合成，且产率接近理论最佳值[13]，展现出了良好的应用前景。但是，该酶还存在底物谱较窄，酶促反应受底物的限制较大等不足，需要对酶进行改造和优化[13]。

定向进化是通过对蛋白质编码基因进行易错PCR、DNA改组、定点饱和突变等方法进行连续的随机突变、重组并通过高通量筛选方法获得期望酶突变体的一种技术。定向进化技术作为改造酶分子的有效策略，现已广泛应用在工业、环境以及医药等相关生物酶分子的改造领域[14-16]。由于定向进化技术需要对突变体库进行大量的筛选，所以实现对酶定向进化改造的首要步骤就是建立起该酶的高通量活性筛选体系。因……