雷先会，赵蔚萍，杨 森

热休克蛋白60（HSP60）为细菌的主要抗原，其作用机制尚不明确。可能是通过介导细菌附着于上皮细胞，刺激宿主免疫反应[1]，进而诱导感染。研究表明，由耶尔森氏菌和幽门螺杆菌纯化而来的HSP60可诱导人胃黏膜上皮细胞分泌IL-8，但大肠杆菌纯化得到的HSP60却不能[2]。因此，HSP60的作用机制似乎与其细菌来源密不可分。放线共生放线杆菌（Aa）是重要牙周致病菌，可扰乱宿主免疫防御系统[3]。国外研究报道，Aa可侵入人口腔颊黏膜上皮细胞[4]。邹博等[5]采用荧光原位杂交技术和激光共聚焦扫描显微镜检测到，在颊黏膜上皮细胞内，Aa占全细菌的相对比例为60%～100%，提示Aa可在口腔黏膜上皮内定植，是口腔黏膜病的主要致病菌。本研究从Aa中提取并纯化HSP60的细菌同源物GroEL（AaGroEL），研究其对OMECs增殖的影响及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 AaGroEL的纯化 采用ATP-琼脂糖亲和层析及SDS-PAGE凝胶电泳，从Aa（ATCC公司）中提取并纯化AaGroEL[6]。

1.2 OMECs分离培养及干预 收集15名正常牙周健康者的口腔黏膜，其中男性7名，女性8名。口腔黏膜经PBS反复洗涤后，去除黏膜下组织，浸入2.5 g/L的中性蛋白酶中，4℃消化18 h。然后撕下上皮层，置入 0.25%胰蛋白酶和 0.02%EDTA（1∶1）的混合消化液中，37℃振荡消化10 min；再加入10%胎牛血清终止消化，用吸管吹打制备成单细胞悬液，接种于含有10%胎牛血清的DMEM培养基，5%CO2、37℃恒温箱培养。当OMECs细胞汇合度达到80%以上时，转入无血清的DMEM培养基中培养24 h。 然后加入 0.25 g/ml的 AaGroEL（HSP60组），对照组则加入溶媒。

1.3 细胞增殖率检测 将上述两组细胞以1×103的密度接种于96孔板，5%CO2、37℃恒温箱培养。分别于培养……