含4 种食源性病毒检测靶标多联装甲RNA的制备、纯化与定值
2019-05-21李风铃逄凤娇江艳华王联珠翟毓秀
姚 琳,张 奇,李风铃,张 媛,逄凤娇,江艳华,*,王联珠,翟毓秀
(1.中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室,山东 青岛 266071;2.獐子岛集团股份有限公司,辽宁 大连 116001)
诺如病毒(norovirus,NoV)、甲肝病毒(hepatitis A virus,HAV)、轮状病毒(rotavirus,RV)、星状病毒(astrovirus,AstV)等食源性病毒引发的公共卫生与食品安全问题已成为影响全球人类健康的主要问题[1-2]。2006—2007年,日本、英国爆发NoV疫情,造成共约500万 人感染;1988年我国上海爆发HAV疫情,造成约30万 人感染;RV是婴幼儿腹泻的主要病原,世界范围内每年估计约有5%的儿童死于RV感染[3];目前AstV在一些国家的调查中发现已相当普遍,阳性检出率在2%~8%之间[4-5]。食源性病毒可通过受污染的水、贝类、果蔬等引起疾病的爆发和流行[6-7]。实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)是检测食品中食源性病毒的最主要方法。由于食品基质复杂、干扰因素多且病毒含量较低,通常需要在检测过程中添加阳性质控样品,以确保检测结果的准确性和可靠性。对于上述RNA病毒,近年来有研究者采用体外转录的裸露RNA片段作为实时荧光定量RT-PCR质控样品[8-10],但存在不能监控病毒粒子裂解、RNA提取等关键环节且易降解等缺点。
针对上述问题,Dubois等[11]建立了装甲RNA技术,即通过分子生物学手段将目标RNA片段包裹在MS2噬菌体病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)内部,使之能抵抗环境和样本中核酸酶的降解,同时其整体结构又很好地模拟了病毒衣壳蛋白-核酸天然存在的特征,具有稳定、无生物安全隐患、可有效评价病毒裂解与提取效率等检测全过程的优点,该技术已成功应用于肠道病毒[12]、人体免疫缺陷病毒[13]等病毒的阳性质控样品的制备。……
