朱艳，朱玉广，曹智，滕兴波，孙海霞，刘宪金，杨伟舟

(潍坊医学院附属医院，山东潍坊261053)

后囊膜混浊(PCO)是现代白内障手术后常见的并发症之一，影响患者视功能恢复，可造成严重的视力损害[1]。白内障手术后残存的晶状体上皮细胞(HLECs)发生上皮-间充质转化(EMT)是PCO形成的病理基础[2]。整合素连接激酶(ILK)是一种丝氨酸/苏氨酸细胞内蛋白激酶，ILK参与整合素、缺氧诱导因子1(HIF-1)等多条细胞内外信号转导通路，ILK活化后可调节细胞凋亡、黏附、增殖、分化及血管生成等多种生物学过程[3～5]。另外，ILK也是一种低氧反应因子，在细胞缺氧时表达增高[6,7]。本课题组前期研究发现，ILK参与TGF-β2诱导的HLECs EMT[8]。最近研究表明，缺氧可诱导HLECs发生EMT[9]。然而，对于缺氧条件下ILK是否参与HLECs的EMT目前尚不清楚。2018年1～6月，本研究建立HLECs缺氧模型，观察ILK在缺氧HLECs中的表达变化及其对细胞EMT的影响，从新的视角探索HLECs EMT早期发生机制，寻找早期干预EMT的有效方法。

1 材料与方法

1.1 细胞与主要实验材料 人永生化晶状体上皮细胞HLEC-B3(美国ATCC公司)，兔抗人ILK单克隆抗体、兔抗人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体(美国Sigma公司)，兔抗人纤维连接蛋白(FN)单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，羊抗兔IgG(美国Abcam公司)，DMEM细胞培养液、胎牛血清(美国GIBCO公司)，CoCl2(美国Sigma公司)，TRIzol试剂(美国Invitrogen公司)，ILK抑制剂QLT0267(加拿大QLT公司)，PCR引物(上海生工公司)。

1.2 HLECs缺氧模型构建及ILK检测 取液氮保存的HLEC-B3细胞系，在37 ℃水浴箱中快速解冻，细胞悬液转移到离心管，滴加DMEM培养液，吹打混匀后离心，弃上清液，加入含双抗抗生素的DMEM培养液(20%胎牛血清)，吹打混匀，在37 ℃、5% CO2培养箱中单层贴壁培养。……