许静，孙诚谊，喻超，何晓晓，杨盛力

(1贵州医科大学，贵阳550000；2贵州医科大学肝胆胰脾重点实验室；3华中科技大学同济医学院附属梨园医院)

生物钟是参与协调机体各种组织器官昼夜节律的一种内源性调控系统，与人体各项生理活动密切相关[1～3]。生物钟的基本分子机制主要由一系列核心元件组成的转录、翻译负反馈环构成，包括PER1-3、CRY1-2、CLOCK、BMAL1、TIMELESS、NPAS2、NR1D1、DEC1、DEC2和RORA等。目前研究[4～7]表明，生物钟调控系统紊乱与多种肿瘤的发生发展密切相关，其机制可能是生物钟对肿瘤细胞的增殖、侵袭及耐药等恶性生物学行为有一定影响。CRY2在人骨肉瘤、乳腺癌、大肠癌等多种实体肿瘤中表达上调，且其高表达可促进肿瘤细胞恶性生物学行为[8，9]。本课题组前期研究发现，生物钟基因在肝细胞癌中的表达具有显著差异，对肝癌的发生发展具有显著意义[14，15]。研究[10]发现，生物钟基因可通过调控下游多种信号通路从而影响细胞周期及相关基因的表达，最终调控肿瘤细胞的生物学功能。2018年5～9月,本研究观察了过表达CRY2的肝癌细胞系HepG2增殖能力变化，及细胞中多种生物钟基因和蛋白的表达变化，从而研究CRY2对肝癌细胞生物钟网络调控的影响。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 DMEM培养基、PBS和胎牛血清购自美国Hyclone公司；TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司；逆转录试剂盒购自美国Fermentas公司；CCK-8检测试剂盒；PCR引物由武汉谷歌生物科技有限公司提供；鼠抗人CRY1单克隆抗体、兔抗人CRY2多克隆抗体及兔抗人CLOCK多克隆抗体购于Abcam公司；兔抗人β-actin单克隆抗体购于Santa Cruz公司；……