张 强 陈 轩 徐 亮

2型糖尿病(T2DM)是一种常见的、多发的内分泌失代谢性性疾病，其发病环节主要是胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)和胰岛β细胞功能受损。现相关研究发现内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)、炎性反应是导致糖尿病、IR和肥胖发生的重要途径。胰高血糖样肽-1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)是肠-胰岛轴中控制T2DM最核心的介导因子，可抑制β细胞凋亡并促进β细胞在体外和体外培养的细胞增殖[1]。艾塞那肽是第一个获得FDA批准用于临床的短效GLP-1类似物类降糖药[2]。

材料与方法

1.研究材料:小鼠INS-1细胞购自上海华拓生物有限公司；培养基(DMEM，1640)、平衡盐溶液(PBS)、澳洲胎牛血清(FBS)及胰蛋白酶均购自美国Gibco公司；c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)或应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase，SAPK)抗体、免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、凋亡蛋白(caspase-3)、内参(β-actin)购自美国Cell Signaling Technology(CST)公司；RIPA裂解液、PMSF酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、BSA封闭液、山羊抗鼠、山羊抗兔、MTT试剂盒、PVDF膜发光试剂盒(BeyoECL Plus)购于碧云天生物技术公司；JNK激动剂(Anisomycin)购于Selleck公司；艾塞那肽(Exendin-4)购于美国MCE公司。

2.细胞分组及培养：根据细胞生长情况，将对数期生长的INS-1细胞按不同的处理方式分为4组：对照组(A组，完全培养基)、高糖组(B组，30mmol/L高糖培养基)；高糖+100nmol/L艾塞那肽组(C组)；高糖+100nmol/L艾塞那肽+250ng/ml JNK激动剂(Anisomyci)组(D组)；完全培养基(含10%胎牛血清及1%双抗的1640培养基)，于37℃、5%CO2孵箱中培养，每隔24h换液1次，高糖组采用间断性高糖刺激(即30mmol/L高糖培养基与正常糖浓度培养基24h交替培养)，C组培养(高糖+100nmol/L艾塞那肽与正常培养基+100nmol/L艾塞那肽24h交替培养)，D组前5天培养为(高糖+100nmol/L艾塞那肽与正常培养基+100nmol/L艾塞那肽24h交替培养)，最后2天加入250ng/ml JNK激动剂处理。……