王黎明，杨大业，仇剑，张德巍

（中国医科大学附属第四医院第三普通外科，沈阳 110032）

肺癌是病死率居世界首位的恶性肿瘤，主要分为小细胞肺癌 （约占15%） 和非小细胞肺癌 （约占80%） 两大类［1-3］。虽然目前外科手术及联合治疗有了很大的进展，但是其5年生存率仍然不高。

miRNA是长度在18～25个核苷酸的内源性非编码小分子RNA。miRNA在进化上高度保守，具有多种生物学功能，对恶性肿瘤的发生发展等过程有重大影响。与mRNA相比，miRNA代谢周期长，更适合作为肿瘤的标记物［4-5］。miR-24在多种肿瘤中存在异常表达的现象，在乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌等肿瘤中miR-24均被发现有不同程度的下调［6］，在宫颈癌Hela细胞中miR-24也被证明可以显著地抑制细胞生长、促进细胞凋亡［7-9］，但是在肺癌中鲜有报道。本研究拟探讨miR-24调节肺癌发生发展的机制，为肺癌的治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

人肺癌细胞系A549 （实验室冻存） ，DMEM培养基 （美国HyClone公司） ，胎牛血清 （天津灏洋生物有限公司） ，miR-24拟似物 （CATGAGGGCAGAAACCG ATGCAA） ，miR-24抑制物 （GTTGCATCGGTTTCTGC CCTCATG，广州锐博生物有限公司） ，台盼蓝 （上海碧云天生物有限公司） ，噻唑蓝 （thiazolyl blue，MTT） ，抗体：周期素依赖性激酶4 （cyclin dependent kinase 4，CDK4） ，周期素依赖性激酶6 （cyclin dependent kinase 4，CDK6） ，基质金属蛋白酶2 （matrix metalloproteinase 2，MMP2） 和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）（美国Santa公司） ，SYBR Green （美国Promega公司） 。

选取本院2010至2015年术前未接受过放化疗的肺癌患者30例，其中，＜45岁8例，≥45岁22例，平均年龄49.25岁 （42～67岁） 。取其肿瘤组织及癌旁组织，组织取下后置于液氮中备用。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养：实验中所需的肺癌细胞系A549细胞为实验室冻存，在25 mL 培养瓶中培养，并加入适量含10%胎牛血清的无抗生素的DMEM培养液，于5%CO2、37 ℃的孵箱条件下培养，取对数生长期细胞用于实验。……