卢北玲，史剑飞，周军

（1.陕西省西安市中医医院 检验科，陕西 西安 710001；2.陕西省西安市儿童医院 检验科，陕西 西安 710003；3.中南大学湘雅医院 医学科学研究中心，湖南 长沙 410008）

铅是广泛存在于自然界的一种重金属，对中枢神经系统的损害是不可逆的[1]。铅暴露造成幼脑学习能力下降，但却鲜有文献解释成年人在铅暴露环境下的变化，以及不同时间的铅暴露对大脑功能的影响是否一致。文献报道主要集中在铅对脑海马区的损伤，很少对脑皮质功能的改变进行研究[1-3]。本实验将豚鼠在含铅环境暴露不同时间后，对皮质表达的自噬蛋白进行分析，为早期预防铅暴露危害提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康成年豚鼠，雌雄不限，体重400～500 g，SPF清洁级，由中南大学实验动物学部提供。全部实验动物在适应性饲养5～7 d后用于实验，分笼饲养，12 h昼/夜循环照明，自由饮食和饮水，室温（20±2）℃。

1.2 主要仪器与试剂

0.2%醋酸铅溶液（上海碧云天生物公司），ATG5（NB100-53818）、Beclin1（NBP1-00085）、LC3B（NB100-2220）购自美国Novus公司，多功能酶标仪（M200pro，奥地利Tecan 公司），石蜡包埋机（EG1150）、倒置显微镜（DM2000）购自德国Leica公司。

1.3 实验动物分组与处理

18只成年豚鼠随机分为4组：对照组（3只），以及铅暴露15、60和90 d组（每组5只）。对照组给予等量的生理盐水，铅暴露组用0.2%醋酸铅饮用水喂养豚鼠。喂养不同时间后对动物进行麻醉，断头取脑，立即放入4%多聚甲醛溶液中进行固定、脱水、石蜡包埋、切片。

1.4 免疫组织化学法

石蜡切片在烤箱烤干后，进行脱蜡及水化，用磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffer saline, PBS）浸泡切片2、3次，5～10 min/次，用3% GS或10% HS封闭……