彭志锋，刘颖，李晨旭

（山西大同大学医学院 生理教研室，山西 大同 037009）

糖尿病神经病理性疼痛是糖尿病常见并发症[1]。许多证据表明，脊髓背角（spinal dorsal horn, SDH）小胶质细胞激活在病理性疼痛中发挥重要作用[2-3]。以往研究表明，在脊髓神经损伤模型中小胶质细胞合成和释放趋化因子配体3（CC-chemokine ligand 3,CCL3）有助于诱导机械异常性疼痛[4]。大鼠鞘内注射CCL3可产生机械痛觉过敏[5]。CCL3也可激活其同源受体CCR5和CCR1，鞘内注射CCR5拮抗剂可减轻外周神经损伤引起的疼痛过敏[5]。此外，嘌呤P2X7受体（purinoceptor P2X7 receptors, P2X7R）的表达也可促进SDH小胶质细胞释放CCL3[6]。然而，脊髓CCL3和P2X7R在糖尿病神经病理性疼痛模型中的作用未见相关报道。因此，本研究目的是探讨脊髓CCL3和P2X7R在链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）诱导大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及分组 雄性SD大鼠，体重180～200 g，购于山西医科大学实验动物中心，动物许可证号：SCXK（晋）2009～0001。室内温度保持在25℃左右，湿度约为50%。12 h昼/夜循环照明，自由饮水和进食。将SD大鼠随机分成对照组和STZ组，每组25只。根据鞘内注射药物将STZ组进一步分为CCL3组、IgG2A，以及A438079组、PBS组，每组5只。实验前各组大鼠体重、空腹血糖和缩足阈值（paw withdrawal threshold, PWT）比较，差异无统计学意义，具有可比性。

1.1.2 实验仪器和试剂 冷冻切片机（德国Leica公司，SM2010），STZ、A438079（P2X7R拮抗剂）、抗兔Alexa Fluor 488购自美国Sigma公司，Iba1抗体（美国Millipore公司），CCL3中和抗体、IgG2A购自南京多瑞斯科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 大鼠糖尿病模型的复制 用生理盐水配置成2% STZ，大鼠腹腔单次注射65 mg/kg STZ[7]。检测STZ腹腔注射1周后大鼠尾静脉空腹葡萄糖水平及1个月后体重变化，对糖尿病发病进行评估。……