薛云 申珅 刘雅萍 崔艺浓 杜艺彤 肖玉莲 脱厚珍

不宁腿综合征(restless legs syndrome，RLS)是常见的神经系统感觉运动障碍性疾病，其主要表现为难以名状的腿部不适感，如酸胀、针刺等，并迫使患者产生活动下肢的冲动，症状在休息或夜间时发生或加重，活动后上述症状可减轻。既往对RLS的遗传学研究发现了多个与不安腿相关的遗传位点。全基因组关联分析发现MAOA、MEIS1、BTBD9、MAP2K5/LBXCOR1、PTPRD、NOS1基因可能增加RLS患病风险[1]。国内相关研究较少，可能与家系人员分散，样本获取困难等有关。本研究通过对一个患病人数多，患病程度重的RLS家系进行MassARRAY质谱法检测单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)位点，从而推测与该家系发病可能有关的基因及SNPs，进一步探究国内RLS家系遗传特点。

1 材料和方法

1.1观察对象选取首都医科大学附属北京友谊医院神经内科门诊就诊的RLS患者，从中筛选出家族人数较多、遗传方式明确的家系。获得知情同意后，由2位神经科医师收集该家系先证者及患病成员的临床资料，包括病史、体格检查等。RLS诊断标准依据2014年国际不安腿综合征协作组颁布的诊断指南[2]。并以IRLS-RS量表(International RLS Rating Scale，IRLS-RS)对RLS症状的严重程度评分，从而进行严重程度分级。

1.2采集血样对家系中患者及其亲属成员每人抽取外周静脉血4 mL，EDTA抗凝管保存，共收集有效血样12份提取DNA，均DNA浓度≥5 ng/μL，-20°C保存备后续实验，其中Ⅱ1、Ⅱ5、Ⅱ7、Ⅲ3、Ⅲ6、Ⅲ7、Ⅲ9、Ⅲ10均未提供血样。

1.3MassARRAYSNP检测

1.3.1SNP选择及引物设计：通过总结文献，选择了国内外已报道与RLS发病相关的SNP位点，共涉及8个基因20个SNP位点[3]。采用 Agena 公司在线引物设计软件 Assay Design Suite v2(https：//seqpws1.agenacx.com/AssayDesignerSuite.html)在线设计引物，基因及SNP位置及引物序列见表1。……