廖成水，王晓利，杜付玉，郁 川，余祖华，张春杰，李银聚，吴庭才，刘明远，程相朝

旋毛虫是一种重要的人兽共患胞内寄生虫，寄生于宿主骨骼肌细胞，目前旋毛虫具有9个种和3个基因型12个物种[1]。一旦摄入含有旋毛虫幼虫的动物肉后，肌肉幼虫通过消化酶从包囊释放到胃中，进入肠道后发育为感染性幼虫[2]。1835年Page和Owen在实验中首次分离旋毛虫[3]，随后大量研究发现旋毛虫幼虫入侵机体不是简单的机械性渗透的结果[4-5]，并且认为排泄/分泌产物在旋毛虫发育、侵袭和寄生过程中起着重要作用[6]。

核酸酶广泛存在于微生物，主要参与营养代谢、遗传物质的复制、重组和修复机制以及与微生物感染、免疫有关[7]。旋毛虫基因组中拥有125种庞大的DNase II家族蛋白，并且一半以上属于编码排泄/分泌产物[8]，但DNase II家族蛋白在旋毛虫的识别和侵入过程中起的关键作用仍未得到很好阐述。Wang等研究发现旋毛虫体外感染肠上皮细胞时可产生5′-nucleotidase蛋白[9]。5′-nucleotidase是一个核苷酸代谢酶，催化核苷5′-二磷酸酯的水解中生成5′-单磷酸核苷[10]。许多寄生虫可分泌5′-nucleotidase，但目前有关旋毛虫5′-nucleotidase基因及蛋白的研究报道较少。为此，本研究对旋毛虫5′-nucleotidase基因进行克隆，并进行了原核表达，为进一步5′-nucleotidase在旋毛虫感染过程中的作用研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1动物、质粒、菌株和虫种 Wistar大鼠(200.0±20.0 g)购自吉林大学白求恩医学院动物实验中心；中国河南猪旋毛虫分离株Trichinellaspiralis(genotype T1)，国际标准虫种编号为ISS534，由本室大鼠传代保种；pUC18和pET-32a购自宝生物工程(大连)有限公司，由本实验常规保存；……