， ，华芳，国伟

恙虫病(ScrubTyphus)是由恙虫病东方体(Orientiatsutsugamushi)引起的急性发热性传染性疾病。它是一种由恙螨叮咬引起传播的自然疫源性疾病。恙虫病是一个公共卫生问题，全球大约有55%人口在恙虫病流行区域居住，每年发病人数大约有100万人[1]。近年来，我国恙虫病疫情不断扩散，发病呈上升趋势。为掌握厦门市恙虫病病流行病学特征，为防控工作提供依据，我们对1954年以来厦门市恙虫病发病资料、宿主、媒介和和病原检测情况进行了总结和分析。

1 材料与方法

1.1疫情资料 厦门市1954—2016年恙虫病发病资料通过查阅《厦门市卫生志》[2]和中国疾病预防控制信息系统。

1.2恙螨宿主和恙螨调查 厦门市宿主和媒介资料通过查阅相关文献并结合2014-2015年在集美区、海沧区和同安区开展相关调查，收集恙螨并鉴定；采用无菌方法解剖鼠形动物，取鼠肝、鼠脾等脏器标本，将鼠肝、鼠脾放入相应编号的无菌冻存管内，送回实验室立即开展恙虫病检测。否则应置于-80 ℃超低温冰箱内保存。

1.3 恙虫病东方体分型检测

1.3.1总肝组织、血液DNA的提取 对168份宿主动物肝组织、100份人血液DNA的提取，提取的DNA进行巢式PCR检测后，进行琼脂糖凝胶电泳的检测，在150 bp左右处有条带的话，进行一代测序验证。

1.3.2 PCR扩增

1.3.2.1设计恙虫病PCR检测序列和引物，进行巢式PCR检测。

引物序列扩增片段/bpa5'- TACATTAGCTGCGGGTAT-GACA-3'306～339b5'- CCAGCATAATTCTTCAAC-CAAG-3'a'5'- GAGCAGAGCTAGGTGTT-ATGTA-3'150～168b'5'- TAGGCATTATAGTAGGC-TGAGG-3'

1.3.2.2恙虫病PCR检测体系(20 μL)

一次及二次PCR反应体系

组分(10 μL体系)体积/μL10×buffer2.0 Mg2+1.2 dNTP 1.6 Taq HS0.2 Sybr-green0.2 DNA100 ng 引物F、R(10 μmol/L)各0.4 ddH2O加至20

1.3.2.3恙虫病PCR检测条件

恙虫病东方体巢式PCR检测反应参数

循环数变性(94 ℃)退火温度第一、二轮均选(50 ℃)延伸(72 ℃)15 min——351 min1 min1 min1——5 min

1.3.3序列分析与结果分析采用巢式PCR 鉴定恙虫病患者全血标本和宿主动物肝 OtDNA。采用OtDNA 为模板，按照特异性表面抗原 Ot56KD 蛋白基因片段设计针对引物对巢式PCR阳性进行测序分析，在GenBank中获得Ot的注册序列，测序结果与Karp、Kawasaki、Gilliam、Kato、等序列顺序进行比对，并用 DNAman软件读取数据，计算一组基因序列内及基因组间进化距离，进行同源性对比、系统进化树分析。

1.3.4PCR检测试剂 DNA提取试剂盒：TIANGEN组织/血液基因组；采用生物工程(上海)股份有限公司合成的引物；PCR反应缓冲液：Qiagen(凯杰公司)；Taq HS酶：TAKARA生物工程公司；dNTPs：东洋纺生物科技有限公司；无水乙醇：厦门科展生物有限公司。

1.3.5仪器 Thermo Fish公司生产的Thermo Scientific NanoDrop 2000；北京六一仪器厂生产的BC-subMIDI电泳仪；KODAK Gel Logic 200生产的凝胶成像系统；湖南湘仪离心机仪器有限公司生产的H1650-W台式高速离心机；杭州博日科技有限公司生产的TC-XP-D 基因扩增仪；Thermo Fish公司生产的台式恒温金属浴；Thermo Fish公司生产的微量移液器；苏州净化工程技术有限公司生产的超净工作台；Thermo Pikoreal 96 荧光定量PCR仪；QIAGEN Rotor-Gene Q荧光定量PCR仪。

1.4统计分析 SPSS 17.0软件对资料进行描述性统计和卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

表1 厦门市1954-2016年人间恙虫病疫情概况Tab.1 Epidemic situation of human Scrub typhus from 1954 to 2016 in Xiamen

图1 厦门市1954-2016人间恙虫病疫情趋势Fig.1 Epidemic trend of human Scrub typhus from 1954 to 2016 in Xiamen

2.2地区分布 对2006-2016年厦门市报告的690例恙虫病进行分析，690例病例中，思明区273例，占39.57%，湖里区119例，占17.25%，各区发病数详见表2。

2.3时间分布 对2006—2016年厦门市报告的690例恙虫病进行分析，按照公历法划分(四季划分：3～5月春季、6～8月夏季、9～11月秋季、12～次年2月冬季)，厦门市恙虫病发病时间主要集中在夏季，病例占55.07%；秋季占31.30%；春季占8.41 %；冬季占5.22%。

表2 2006—2016年厦门市恙虫病地区分布Tab.2 The regional distribution of human Scrub typhus from 2006 to 2016 in Xiamen

2.4人群分布 对2006-2016年厦门市报告的690例恙虫病进行分析，男性349例，女性341例，男女性别比1.02∶1；平均年龄40.59±28.01岁，以中年为主，其中20～65岁594例(占86.09%)，最小年龄2岁、最大年龄87岁；职业以农民最多，有147例(占21.30%)。

2.5宿主动物 鼠类是恙虫病最重要的储存宿主，目前我国18种啮齿目动物发现恙虫病东方体，如黄毛鼠、黑线姬鼠、褐家鼠、黄胸鼠等；其次为食虫目动物，如臭鼩鼱；其他如兔、猪、猫和禽类也能感染[3]。张财兴于1979-1992年在集美、杏林和厦门岛内共捕获野栖鼠形动物1 065只，黄毛鼠507只，褐家鼠105只，黄胸鼠84只，田小鼠41只，臭鼩鼱328只，以黄毛鼠(47.61%)为优势鼠种[4]；市防疫站于1987年患者可疑感染的地点万石植物园、南普院南坡、日光岩进行捕鼠调查，食虫目臭鼩的数量最多，占82.00%[2]；2014-2015在海沧、集美和同安共捕获鼠形动物640只，褐家鼠453只、臭鼩88只、黄毛鼠62只、黄胸鼠31只和小家鼠6只，以褐家鼠(70.78%)为优势鼠种。

2.6媒介恙螨 恙螨幼虫是恙虫病的传播媒介，我国已经证实的媒介有地里纤恙螨、小盾纤恙螨、微红纤恙螨、高湖纤恙螨、海岛纤恙螨和吉首纤恙螨等[3]。张财兴于1979-1992年捕获野栖鼠形动物1 065只，781只带恙螨，染螨率73.33%，检出82 029只恙虫，恙螨总指数77.02，经鉴定恙螨种类有2科3亚科7属8种，按构成比依次为中华无前恙螨(54.56%)、地里纤恙螨(40.03%)、羊城背展恙螨(3.30%)、巨螯齿恙螨(1.04%)、小板纤恙螨(0.55%)、伊香钳齿恙螨(0.26%)、香港合轮恙螨(0.19%)和福建爬虫恙螨(0.06%)[4]；厦门市防疫站于1987年调查鼠形动物染螨率高达52.40%，螨指数53.90，地里纤恙螨在厦门市占绝对优势，占各种恙螨总数的87.7%[2]；2014-2015年调查鼠形动物640只，共检出恙螨791只，经鉴定隶属1科2亚科3属6种，以地里纤恙螨为优势螨种，370只，占46.78%；其他依次为小板纤恙螨(36.41%)、羊城背展恙螨(8.34%)、中华无前恙螨(4.17%)、红纤恙螨(2.15%)和异毛纤恙螨(1.77%)。

2.7病原型 目前恙虫病东方体的基因分型主要包括Karp、Kato、Gilliam、TA763、TA678、TA716、Kawasaki、Kuroki、Shimokoshi等，我国福建、广东地区以Karp型为主，江苏北部、山东地区以Kawasaki型为主[3]。市防疫站于1987年从寄生的臭鼩地里纤恙螨分离出6株恙螨立克次体[2]；2014-2015年检测可疑患者100份全血，阳性24份，阳性率24.00%，检测鼠形动物肝168份，阳性53份，阳性率31.55%。阳性77份标本中，Karp阳性66份，占85.71%(66/77)、Gilliam阳性10份，占12.99%(10/77)和kato阳性1份,占1.30%(1/77)；24份人间恙虫病东方体基因分型：Karp阳性14份，Gilliam阳性9份和kato阳性1份，以Karp阳性为主，占58.33%(14/24)。53份阳性基因分型：Karp阳性52份，占97.11%(52/53)和Gilliam阳性1份，占1.89%(1/53)，见表3-5、图2。

表3 厦门市恙虫病东方体来源分布Tab.3 The origin distribution of Orientia tsutsugamushi in Xiamen

褐家鼠45阳性GD-E14084KarpKM492920.1同安褐家鼠48阳性GD-E14084KarpKM492920.1湖里褐家鼠49阳性GD-E14084KarpKM492920.1湖里褐家鼠50阳性GD-E14084KarpKM492920.1湖里褐家鼠51阳性GD-E14084KarpKM492920.1湖里鼩鼱52阳性KM11-2KarpGU446591湖里鼩鼱58阳性KM11-2KarpGU446591湖里褐家鼠62阳性KM11-2KarpGU446591湖里褐家鼠63阳性KM11-2KarpGU446591湖里褐家鼠64阳性KM11-2KarpGU446591湖里小家鼠65阳性KM11-2KarpGU446591湖里褐家鼠70阳性KM11-2KarpGU446591湖里褐家鼠71阳性KM11-2KarpGU446591湖里褐家鼠74阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠80阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠81阳性KM11-2KarpGU446591同安表3(续)来源样本编号检测结果菌株编号基因分型登录号采集地点 褐家鼠83阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠84阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠93阳性GDys21GKarpKJ188181同安褐家鼠96阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠97阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠98阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠99阳性GDQY13052GilliamKJ188197.1同安褐家鼠102阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠104阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠106阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠108阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠110阳性KM11-2KarpGU446591同安褐家鼠112阳性KM11-2KarpGU446591集美鼩鼱114阳性KM11-2KarpGU446591集美鼩鼱115阳性KM11-2KarpGU446591集美黄胸鼠JM肝175阳性GD-E14084KarpKM492920.1集美鼩鼱JM肝15207阳性GD-E14084KarpKM492920.1集美褐家鼠JM肝15214阳性GD-E14084KarpKM492920.1集美褐家鼠JM肝15217阳性KM11-2KarpGU446591集美褐家鼠JM肝15229阳性GD-E14084KarpKM492920.1集美褐家鼠JM肝15238阳性GD-E14084KarpKM492920.1集美

表4 厦门市不同鼠形动物基因型分布情况Tab.4 Genetic typing of mammals with Orientia tsutsugamushi,the causative agent of Scrub typhus in Xiamen

2.8疫源地类型 恙虫病在我国呈广泛分布，北方和南方差异显著。长江以南以6-8月为流行高峰，属于“夏季型”，宿主动物以黄毛鼠、黄胸鼠、褐家鼠和黑线姬鼠为主，主要媒介为地里纤恙螨；长江以北以10-11月为流行高峰，属于“秋季型”，宿主动物以黑线姬鼠、社鼠和褐家鼠为主，主要媒介为小盾纤恙螨[3]。根据厦门市恙虫病流行病学特征、宿主动物、媒介恙螨和病原基因型，厦门市属于“夏季型”，主要宿主动物以褐家鼠和臭鼩鼱为主，媒介恙螨以地里纤恙螨为主，基因型以Karp基因型为主。

表5 厦门市不同鼠形动物基因型菌株分布情况Tab.5 Strains or closely related strains of Orientia tsutsugamushi identified in small mammals in Xiamen

图2 厦门市恙虫病病原型分布图Fig.2 Phylogenetic tree based on the 56-kDa TSA partial gene sequence of O.tsutsugamushi in Xiamen

2.9防控策略 针对厦门市恙虫病流行病学特征，采取以灭鼠灭螨为主的综合性防控策略。一是在恙虫病流行季节前和流行季节开展预防性灭鼠灭螨工作；二是在流行季节加强健康教育保护人群健康，如野外作业时,应加强个人防护；三是开展环境治理，创造良好的卫生环境；四是加强监测，及时掌握厦门市宿主动物、媒介和病原体变化；五是加强患者救治，对恙虫病患者,用药要按时足量,防止复发。

3 讨 论

恙虫病是由恙虫病东方体感染引起的一种自然疫源性急性病毒传染病，恙虫病主要传染源是鼠类，恙螨幼虫是主要传播媒介[5]，恙虫病发生和流行与恙螨宿主和恙螨存在、繁殖相关。恙虫病在我国在呈广泛分布，在20世纪80年代末期达到高峰，1989年后我国把恙虫病列为非法定报告传染病，不强制法定报告。2005年以来，随着施行网络直报，我国恙虫病发病呈上升趋势，恙虫病已成为影响我国人民健康的主要自然疫源性疾病之一。厦门市疫情资料表明我市恙虫病发病已居我市报告的自然疫源性传染病首位。

恙虫病流行于热带、亚热带，厦门市雨量充沛，为昆虫孳生提供良好环境。2006-2016年共报告本地病例690例，年平均发病率2.01/10万，发病率曲线呈上升趋势，呈现典型的“夏季疫源病”特征，可能与厦门市人群在夏秋季参与野外活动多、且夏秋季鼠、螨大量繁殖，密度高，增加了暴露风险等因素有关系[6]。2006年以来厦门市恙虫病呈明显上升趋势，特别在2013 年、2014年增加十分明显，可能与厦门市加强恙虫病监测、提高病例发现及报告水平、气候变化等因素有关，厦门市恙虫病疫源地扩散可能与气候变化有关[7]。

厦门市2006-2016年恙虫病男女性别比1.02∶1，发病年龄以20～65岁为主，职业以农民为主，可能是农民居住在农村或郊区，环境差，鼠类多，参加劳作过程中易接触到恙螨，退休人员由于晨练、郊游等活动，接触恙螨幼虫染病。厦门市存在恙螨传播的宿主动物和媒介恙螨，基因分型以Karp为主，占85.71%，厦门市应加强恙虫病东方病原体的基因型别与病原毒力研究，及时发现可能发生的变异，为厦门市恙虫病预防控制提供科学依据。

恙虫病是以鼠类为宿主动物，经恙虫幼虫传播的自然疫源性疾病，应采取以灭鼠灭螨为主的综合控制策略[8-10]，如何减少宿主动物、媒介和减少接触机会是防控的重点和难点，关键有两点，一是流行季节前，开展灭鼠灭螨，控制鼠类密度；二是在流行季节加强健康教育保护人群健康，开展环境治理，创造良好的卫生环境。