傅育卡，陈章兴

食管癌是指发生于食管上皮的恶性肿瘤，约占恶性肿瘤发病率的2%[1-2]，每年20万～40万人死于该病，我国是食管癌高发地区且病死率更高[3-5]。肿瘤细胞的转移是食管癌预后不良的危险因素[6-7]。肿瘤的发生、发展与免疫系统有关，2015年Vacchelli等[8]研究证实，食管癌调节性T细胞表达水平升高，且与预后有关。我国食管癌患者组织中T细胞亚群的失衡情况可能与国外患者不同。另外，Bcl-2等凋亡调控基因与癌症的发生和发展过程关系密切，其在肿瘤细胞中的高表达可以抑制肿瘤细胞凋亡，从而促进肿瘤的进展[9-10]。Song等[11]研究显示，顺铂等可以诱导食管癌肿瘤细胞凋亡，并降低Bcl-2蛋白水平，其杀伤食管癌肿瘤细胞的机制可能是通过下调Bcl-2蛋白而发挥作用。T细胞亚群和Bcl-2蛋白均可导致食管癌的进展，但目前国内相关研究缺乏，本研究探讨了食管癌患者肿瘤组织中T细胞亚群和调Bcl-2表达水平及临床意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取2015年1月—2016年12月解放军174医院收治的食管癌80例，纳入标准：①所有患者均有食管癌病理诊断；②年龄为18～75岁；③有手术适应证(肿瘤无明显外侵，无肝肾肺等远处转移；临床分期为Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期)并在我院行食管癌切除术；④同意参与本研究，并签署知情同意书。排除标准：①肝肾等重要脏器功能不全；②冠心病、心肌梗死、卒中等重大心血管疾病；③溃疡性结肠炎等免疫系统疾病；④合并其他肿瘤；⑤食管结核；⑥甲状腺功能异常；⑦胸膜粘连、肺脓肿等邻近脏器转移；⑧急性或慢性感染性疾病期。本组男49例，女31例；年龄：38～73(58.29±9.91)岁；临床TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期38例，Ⅲ期30例；鳞状细胞癌48例，腺癌32例；肿瘤细胞为高分化44例，中低分化36例；合并局部淋巴结转移49例，食管外膜浸润32例。

1.2研究方法 入院后完善常规实验室检查，择期行食管癌切除术，术中留取食管癌肿瘤组织(距肿瘤边缘>1 cm)为肿瘤组织组和癌旁组织(距肿瘤边缘5 cm)为癌旁组织组。每组80例。分别使用流式细胞仪和免疫组化法检测并比较2组T细胞亚群(CD4+T细胞、CD8+T细胞和调节性T细胞)和Bcl-2蛋白阳性率。分析肿瘤组织中T细胞亚群、Bcl-2蛋白与食管癌淋巴结转移等临床特征的相关性。Bcl-2阳性的标准：黄色或棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞，阳性细胞占细胞总数≥5%提示组织中的Bcl-2阳性。

2 结果

2.12组Bcl-2蛋白比较 肿瘤组织组Bcl-2蛋白阳性病例占77.5%(62/80)，癌旁组织组Bcl-2蛋白阳性病例占15.0%(12/80)；肿瘤组织组Bcl-2蛋白阳性病例高于癌旁组织组(P<0.001)。Bcl-2蛋白阳性细胞占细胞总数的百分比：肿瘤组织为15%，阳性癌旁组织为7%，阴性癌旁组织为2%。见图1。

2.22组T淋巴细胞亚群比较 肿瘤组织组中CD4+和CD8+T细胞表达水平与癌旁组织组比较差异无统计学意义(P>0.05)，但调节性T细胞高于癌旁组织组(P<0.001)。见表1。

表1 食管癌肿瘤组织组和癌旁组织组T淋巴细胞亚群比较

2.3食管癌肿瘤组织中Bcl-2蛋白、T细胞亚群的阳性表达与临床病理特征的关系 合并淋巴结转移和TNM分期为Ⅲ期的食管癌Bcl-2蛋白阳性率、CD4+T细胞、调节性T细胞均高于未合并淋巴转移和TNM分期为Ⅰ和Ⅱ期的食管癌(P<0.05)。病理类型为腺癌和磷癌的食管癌Bcl-2蛋白阳性率、CD4+T细胞、CD8+T细胞和调节性T细胞比较差异均无统计学意义(P>0.05)。肿瘤细胞分化程度为中低分化和食管外浸润的食管癌Bcl-2蛋白阳性率、调节性T细胞均高于高分化和非食管外膜浸润的食管癌(P<0.05)。见表2。

表2 食管癌肿瘤组织中Bcl-2、T淋巴细胞亚群的阳性表达与临床病理特征的关系

2.4食管癌肿瘤组织中Bcl-2蛋白和T细胞亚群的阳性表达的相关性 Bcl-2蛋白表达阳性的食管癌调节性T细胞高于Bcl-2蛋白表达阴性的食管癌(P<0.001)。二者CD4+和CD8+T细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 食管癌肿瘤组织中Bcl-2蛋白和T淋巴细胞亚群的阳性表达的相关性

3 讨论

我国食管癌的发病原因不清[12-13]，导致该类患者死亡的主要因素是肿瘤细胞的生长和转移，主要转移途径包括直接扩散、淋巴结和血运转移等[14]。研究表明，组织中调节性T细胞主要由CD4+T细胞在抑炎因子的作用下分化而成[15]。调节性T细胞在机体对肿瘤细胞杀伤中起到负调节作用，该细胞降低与多种类型的肿瘤患者病死率升高相关[16-18]。2013年Izawa等[19]研究显示，食管癌和胃癌肿瘤组织中调节性T细胞升高的患者，H2O2诱导的细胞凋亡作用降低。Bcl-2蛋白是一种凋亡调控基因，在肿瘤细胞中的高表达与肿瘤细胞的不受限制生长有关。国外研究已证实Bcl-2蛋白在食管癌组织中高表达，与患者临床预后恶化有关[11]。

本研究结果显示，食管癌肿瘤组织中调节性T细胞及Bcl-2蛋白阳性率显著增加，且合并淋巴结转移、Ⅲ期食管癌和中低分化、食管外膜浸润的食管癌患者Bcl-2蛋白阳性率和调节性T细胞显著增高。提示我国食管癌肿瘤组织中Bcl-2蛋白和调节性T细胞高表达，且与淋巴结转移、临床TNM分期、肿瘤细胞中低分化和食管外膜浸润有关，均是食管癌预后不良的临床征象[20- 21]，导致患者病死率增高。在肿瘤组织中，CD4+T细胞可以分化为调节性T细胞，抑制机体对肿瘤细胞的杀伤作用，而CD8+T细胞可以分化为细胞毒性T细胞，对肿瘤细胞起杀伤作用[17, 22]。本研究结果显示,合并淋巴结转移和Ⅲ期食管癌CD4+T细胞水平升高，这可能是肿瘤细胞诱导CD4+T细胞织浸润肿瘤组，进而产生大量调节性T细胞，最终介导肿瘤细胞对免疫的耐受。在其他肿瘤的研究中表明CD8+T细胞在肿瘤组织中低表达，可引起细胞毒性T细胞产生减少，对肿瘤细胞的杀伤作用降低[23-25]。本研究显示,CD8+T细胞在肿瘤组织和癌旁组织中比较差异无统计学意义，与淋巴结转移、TNM分期等临床特征也无相关性。这可能与病例的选择或不同癌症的特性相关，尚有待进一步的临床研究证实。

Bcl-2凋亡调控基因又称B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白基因，主要作用是抑制细胞包括肿瘤细胞的凋亡。组织中低水平的Bcl-2蛋白表达对维持机体新陈代谢具有重要意义，若发生基因变异可导致Bcl-2蛋白在组织中高表达，引起细胞增殖和凋亡调控失衡，从而细胞无限制繁殖，最终诱导癌症发生；且癌症发生后Bcl-2蛋白在肿瘤组织中的高表达，可促进肿瘤细胞进一步繁殖，使肿瘤细胞繁殖生长加速和转移[26-27]。文献报道，顺铂或许可通过降低肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达水平而改善食管癌患者临床预后[11]。本研究结果显示，Bcl-2蛋白的阳性表达与调节性T细胞增高有关，提示Bcl-2蛋白阳性的食管癌患者免疫功能处于抑制状态，具体机制尚不明确。可能与Bcl-2蛋白抑制细胞凋亡，降低线粒体氧化水平，细胞内的氧化还原电位等有关，但目前缺乏研究探讨Bcl-2蛋白与食管癌患者组织中T淋巴细胞亚群的研究，尚需其他研究进一步证实。

综上所述，食管癌肿瘤组织中T淋巴细胞亚群失衡和Bcl-2蛋白高表达，二者与肿瘤的进展相关。