翟立翔，李国丽，冷艳，李师翁,*，陈熙明，陈拓，刘光琇

1(兰州交通大学 化学与生物工程学院，甘肃 兰州，730070) 2(甘肃省极端环境微生物资源与工程重点实验室/中国科学院西北生态环境资源研究院沙漠与沙漠化重点实验室，甘肃 兰州，730000)

乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)是一种能高效表达外源蛋白的酵母表达系统，作为美国FDA认证的食品安全级酵母[1]，具有遗传稳定，蛋白可翻译后加工，产物可分泌到胞外，可高密度发酵且发酵过程无产气现象，不会发生爆罐、发酵过程中所需的诱导剂是乳糖或半乳糖，相对甲醇诱导更安全、表达产物可直接应用于食品及饲料工业中等优点[2]，目前已经有数百种外源蛋白在该系统中获得表达。

抗菌肽PSI是植物天冬氨酸蛋白酶的前体，其典型特征是分子内部有一个约由100个氨基酸残基构成的结构域，被称为植物特异插入片段[2]，对植物病原真菌Verticilliumdahlia具有较强的抗性，其作用机制是通过与磷脂膜泡相互作用，在一定pH下或者依附于脂质而诱发细胞内容物的裂解，从而杀死生物病原体，抑制真菌孢子的形成[3-4]。

高密度发酵是提高基因工程菌外源蛋白表达量的有效策略。迄今为止，已有数千种蛋白通过高密度发酵得以大量表达，如人的C型溶菌酶LYZL6表达量高达331 mg/L[5], 植酸酶酶活达1.34×104U/mL[6], 来自兔出血病病毒的衣壳蛋白表达量达16 mg/L[7], 麦角固醇表达量达1.5 g/L[8]等。但是，由于重组菌本身的局限性，如启动子特性、密码子使用频率或基因拷贝数等，或者是由于发酵工艺的不同，外源蛋白表达量差异很大。……