李旺胜 唐一通 张楚微 王书菲 徐洲 杜陈 金钊

摘要：目的：研究不同DNA抽提方法对肺癌血浆循环DNA的提取效果。方法：选取68例肺癌患者为研究对象，比较GenMagBio磁珠法、SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒方法、苯酚-氯仿法对肺癌血浆循环DNA的提取效果。结果：几种方法中，磁珠法具有最高的提取效率和最低的CV值。结论：磁珠法对肺癌血浆循环DNA具有最好的抽提效果，适合于对小片段DNA的提取。

关键词：肺癌；循环DNA；抽提方法

中图分类号：G642.423 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2018）11-0274-02

循环DNA是存在于人和動物体液中的胞外DNA分子。研究表明，健康人群循环DNA含量极低（约5 μg/L左右）。当机体在炎症、自身免疫病和肿瘤等情况下，其在体液中的含量会大大增加，机制至今仍不明确。因为循环DNA与包括肿瘤在内的一些疾病的产生与发展密切相关，所以其对于肿瘤等疾病的早期诊断和疗效评价具有重要的临床意义。本文分别采用不同的DNA提取方法对肺癌患者的血浆循环DNA进行抽提，其结果报告如下。

一、资料与方法

1.一般资料：以2016年9月—2017年4月的68例肺癌患者为研究对象，其中男43例，女25例，平均年龄（58.2±4.6）岁。

2.方法：所有肺癌患者取静脉血5ml置于EDTA抗凝管中，以3000r/min，离心10min吸取上清血浆于冻存管中，-80℃保存备用。分别参照试剂盒及文献报道方法用血清游离DNA提取试剂盒（北京金麦格生物技术有限公司）、SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒（Sangon Biotech）、苯酚-氯仿法对肺癌血浆循环DNA进行提取。选取K-ras基因为目标基因，并设计扩增探针（Forward primer：5'-ATTAAAAGGTACTGGTGGAG-3'；Reverse primer：5'-CTATTGTTGGATCATATTCG-3'），对三种抽提方法所得循环DNA样本K-ras基因外显子2基因序列进行PCR扩增。……