欧志涛，詹远京，郭家伟，罗 铎

细胞因子诱导的凋亡抑制分子1（cytokine-ind uced apoptosis inhibitor 1，CIAPIN1）是受体依赖性激酶Ras信号通路中的效应分子[1]。研究显示，CIAPIN1被敲除后，胚胎鼠发育个体小，循环和造血器官，如心脏、肝脏、脾脏等发育异常[2]。另有研究指出，CIAPIN1表达与肝癌组织学分级呈负相关，与TNM分级呈正相关[3]。上述发现均提示CIAPIN1在肝癌的发生及发展过程中可能起重要作用，但CIAPIN1对肝癌细胞增殖能力的影响研究尚不多见。本研究构建重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体，探讨了体外调控CIAPIN1基因表达对肝癌HepG2细胞增殖能力的影响，并初步分析了其作用机制，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 主要试剂、仪器和细胞 重组慢病毒CIAPIN1表达载体、CIAPIN1 siRNA慢病毒载体、无关对照siRNA慢病毒载体，均委托上海博上生物技术有限公司合成；ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix、LipofectamineTM 2000、293FT细胞，均购自Invitrogen公司；DMED培养液、胎牛血清，均购自Gibco公司；Matrigel，购自BD公司；全长 CIAPIN1 cDNA克隆pOTB7-CIAPIN1，购自上海英为信生物科技有限公司；鼠抗人CIAPIN1单克隆抗体、山羊抗鼠IgG-HRP，均购自Santa Cruz公司；EDTA购自Sigma公司；抗CyclinD1、抗CDK4、抗CDK2、抗Cyclin E抗体，购自Santa Cruz公司；NF-кB染色试剂购自Thermo公司；IKKβ、磷酸化IKBα、p65和磷酸化抗p65和抗PARP抗体，购自Bioworld Technology；RT-PCR检测仪及其配套分析软件，购自ABI公司；680型全自动酶标仪购自Bio-Rad公司；台式离心机、37℃恒温摇床，均为国产仪器。肝癌细胞株HepG2细胞由我院感染病研究所提供。

1.2 感染用病毒的包装 取对数生长期293FT细胞，以0.25%胰蛋白酶消化，调整细胞密度至6×108个/L，接种至10 cm培养皿，在37℃、5%CO2环境下培养24 h，至细胞达70%～80%融合后，加入ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix、Lipofectamine TM 2000及预先制备的重组慢病毒载体DNA，进行转染。48 h后，取病毒上清液，4℃下4000 g离心10 min，用0.45μm滤膜过滤，测定病毒滴度，分装，置于-80℃保存。……