郭志娟 吉 茹

结直肠癌是指结直肠粘膜上皮和腺体部位发生的恶性肿瘤，外科手术、辅助放疗、化疗等是目前晚期结直肠癌的主要临床治疗手段，但治疗后癌细胞的侵袭和转移仍是影响治疗效果、导致患者死亡的主要原因[1]。众多研究已经表明[2-3]，上皮间质转化是促进结直肠癌、胃癌、肝癌、非小细胞肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤侵袭和转移的独立危险因素，而E-cadherin表达丢失与Vimentin的表达上调是上皮间质转化的重要标志[4]。但目前关于E-cadherin与Vimentin的表达与结直肠癌患者术后的预后关系的相关研究较少见，因此本研究在分析结直肠癌标本中E-cadherin与Vimentin的表达情况与结直肠癌患者临床资料间的关系的基础之上，进一步分析其对结直肠癌患者的预后和生存率判断的临床价值，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2012年1月至2014年12月于内蒙古医科大学附属人民医院行手术治疗的80例结直肠癌患者的结直肠癌组织标本，设为观察组，80例患者均病历资料完整，为原发性腺癌，手术前均未接受过放疗、化疗，术后病理组织检查确诊为结直肠癌，且均经美国癌症联合会标准行TNM分期以及DUCK分期，其中男性47例，女性33例，年龄30～80岁，平均年龄(60.32±16.88)岁。另收集同期因其他原因于我院切除的正常结直肠组织标本30例，设为对照组，其中男性18例，女性12例，年龄30～75岁，平均年龄(56.11±16.08)岁。两组一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有组间可比性。

1.2 方法

所有标本经常规10%中性甲醛固定、石蜡包埋和4 μm厚度切片，65 ℃烤箱过夜，二甲苯两次常规透明后以100%～75%的酒精梯度洗脱，95 ℃下柠檬酸钠抗原修复。采用免疫组化方法检测标本中的E-cadherin与Vimentin蛋白的表达，一抗的阴性对照采用磷酸盐缓冲溶液，试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，所有检测过程严格按照试剂盒操作说明进行。

1.3 结果判定

每张切片结果判读由两名病理医师盲读，根据染色范围和染色强度的评分结果综合判定E-cadherin与Vimentin表达阳性与否。细胞中E-cadherin阳性以细胞膜出现棕黄色颗粒为准，Vimentin阳性以靠近胞膜或胞质呈棕黄色为准；染色范围：每张切片随机选取5个高倍镜视野(*200)，视野中阳性细胞数在25%及以下计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，75%以上计4分；染色强度：染色与背景相似计0分，染色略微高于背景色计1分，染色明显高于背景色计2分，呈深棕黄色计3分。将染色范围和染色强度的评分结果相加，0～3分者定义为此标本E-cadherin或Vimentin表达阴性，3分以上者为此标本E-cadherin或Vimentin表达阳性[5]。

1.4 观察指标

比较观察组和对照组标本中E-cadherin与Vimentin蛋白表达阳性率；收集80例结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、病理分级等临床资料，分析各临床资料与E-cadherin与Vimentin蛋白表达阳性率的关系；80例患者均术后通过电话随访2年，统计2年内复发转移情况及存活与否。

1.5 统计学方法

应用SPSS 17.0统计学软件，计量资料以均值标准差表示，组间差异比较采用t检验，计数资料以百分率表示，组间差异比较采用卡方检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组结直肠组织中E-cadherin及Vimentin表达情况比较

结直肠癌组E-cadherin表达丢失率(77.50%)和Vimentin表达阳性率(51.25%)，均显著高于对照组(16.67%，10.00%)(P<0.05)，见表1。

表1 两组结直肠组织中E-cadherin与Vimentin表达阳性情况比较(例，%)

注：与对照组比较，*为P<0.05。

2.2 E-cadherin、Vimentin表达与结直肠癌临床病理关系

E-cadherin的表达丢失与结直肠癌肿瘤大小、病理分化程度、TNM临床分期、DUCK分期、淋巴结是否转移相关(P<0.05)；Vimentin的阳性表达与结直肠癌肿瘤大小、淋巴结是否转移相关(P<0.05)，见表2。

表2 E-cadherin、Vimentin表达与结直肠癌临床病理的关系(例，%)

注：组间比较，*为P<0.05。

2.3 E-cadherin、Vimentin表达与结直肠癌患者预后的关系

生存时间<2年、2年内发生复发转移的结直肠癌患者的E-cadherin的表达丢失率和Vimentin表达阳性率，均显著高于生存时间>2年、2年内未发生复发转移的患者(P<0.05)，见表3。

表3 E-cadherin、Vimentin表达与结直肠癌预后的关系(例，%)

注：组间比较，*为P<0.05。

3 讨论

近年来随着我国人口老龄化、生活方式和饮食习惯的改变，动物脂肪和高蛋白的过度摄入，食物纤维的摄入不足等因素的影响，我国结直肠癌的发病率呈显著升高趋势，其中以经济发达地区的发病率升高更为明显[6]。虽然近年来结直肠癌的诊疗水平在不断的提升，5年生存率有了显著的提高，但肿瘤细胞的去分化、凋亡与增殖之间的平衡失调、侵袭、转移仍是目前恶性肿瘤的常见临床特征，亦是目前临床治疗恶性肿瘤需要克服的难点和热点问题[7-8]。上皮间充质转化是肿瘤细胞发生侵袭和转移的机制之一，是指上皮细胞内分子重新编程、细胞表型特征发生改变，如丧失E-cadherin蛋白，获得Vimentin蛋白，引起细胞极性的转变，最终使缺乏运动能力的上皮细胞转变为运动能力较强的间充质细胞[9]。

E-cadherin蛋白是指存在于细胞和细胞间、具有粘附作用的钙粘蛋白中的1个亚型，是上皮组织存在的基础[10]。Vimentin即波形蛋白，是间质细胞的标记物之一，具有促进上皮细胞形态改变、增加细胞运动能力的作用[11]。康强等[12]研究表明E-cadherin蛋白的表达丢失与Vimentin蛋白的表达上调与肝内胆管癌的TNM分期、肿瘤分化、淋巴结是否转移等显著相关；陈颖等[5]研究显示，E-cadherin与Vimentin蛋白的表达情况与结直肠癌患者的肿瘤大小，分化程度、TNM分期等密切相关；本研究结果同样显示，结直肠癌组的E-cadherin表达丢失率和Vimentin表达阳性率均显著高于对照组，E-cadherin的表达丢失与结直肠癌患者的肿瘤大小、病理分化程度、TNM临床分期、DUCK分期、淋巴是否转移相关，肿瘤直径越大、肿瘤细胞分化程度越低、TNM临床分期和DUCK分期越高、淋巴转移的结直肠癌患者的E-cadherin的表达丢失率越高；Vimentin的表达阳性仅与肿瘤大小、淋巴是否转移相关，肿瘤直径越大、淋巴转移的结直肠癌患者的Vimentin表达阳性率越高，与病理分化程度、TNM临床分期、DUCK分期关系不显著，同时与姚俊霞等[13]研究结果不一致的原因可能为，本研究样本量较少，致使结果存在一定的偏倚。

上皮间充质转化不仅是肿瘤细胞发生侵袭和转移的机制之一，同时也是肿瘤细胞对化疗药物耐药的机制之一，不仅影响结恶性肿瘤患者化疗的疗效，同时会缩短患者的生存时间[14-15]。因此本研究还进一步对80例接受手术治疗的结直肠癌患者进行了跟踪随访，结果显示，生存时间<2年、2年内发生复发转移的结直肠癌患者的E-cadherin的表达丢失率和Vimentin表达阳性率均显著高于生存时间>2年、2年内未发生复发转移的患者(P<0.05)，提示术后对结直肠癌患者的E-cadherin和Vimentin蛋白表达情况的分析，对生存时间及术后发生复发转移的预判具有一定的参考价值。

综上所述，E-cadherin表达丢失与Vimentin的表达上调与结直肠癌患者的肿瘤大小、病理分化程度、TNM临床分期、DUCK分期、淋巴是否转移关系密切，且对患者术后的生存时间和复发转移的预判具有一定的临床应用价值。

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