吴 潇，吕贝贝*，蒋 玮，王金斌，4，白 蓝，武国干，胡为一，唐雪明**

（1上海市农业科学院生物技术研究所，上海201106；2农业部转基因植物环境安全监督检验测试中心（上海），上海201106；3上海市农业遗传育种重点实验室，上海201106；4上海瑞丰农业科技有限公司，上海201106；5上海安景科技有限公司，上海200051）

微滴式数字PCR（Droplet digital PCR，ddPCR）是近年来迅速发展起来的一种突破性地检测和定量核酸的技术，其基本原理是通过将模板极度稀释，将所有样品在相同条件下进行PCR扩增，实现理论上的单分子扩增，有PCR扩增荧光信号记为1，无荧光信号记为0，反应结果采用泊松概率分布公式，便可计算出样本的原始浓度［1-5］。

外源基因的检测是转基因生物安全评价的重要评价指标之一［6］。目前，外源基因拷贝数和含量分析多采用实时荧光定量PCR技术（Real-time Quantitative PCR，qPCR）。qPCR技术在分析外源基因拷贝数时必须依赖于已知拷贝数的内参基因和标准曲线的建立，是一种相对定量方法，且标准曲线的建立易受到模板纯度、引物和探针的浓度等诸多因素影响［7］。与qPCR方法相比，微滴式数字PCR技术不依赖于标准曲线，实现了DNA检测从相对定量到绝对定量的飞跃［8-14］。QX200微滴式数字PCR系统（QX200TMDroplet DigitalTMPCR）获得了欧盟体外诊断（in vitro diagnostic，IVD）产品 CE认证（CE IVD marking），这是该领域首个获得CE认证的数字PCR系统。QX200 ddPCR系统可以直接从分析器同时读取外源基因和内标基因的拷贝数，快速计算出外源基因的百分含量，测定过程更为方便和快捷。

目前，尚无QX200 ddPCR技术应用于转基因生物外源基因检测分析的相关报道。本试验研究转基因大豆GTS-40-3-2的微滴式数字QX200 PCR检测方法，以期为转基因生物中外源基因拷贝数和外源基因含量的精确测定提供一种新方法。……