刘立兵， 南汇珠， 孙晓霞， 姜彦芬， 王金凤， 王建昌,*

(1.河北出入境检验检疫局技术中心， 河北 石家庄 050051； 2.河北省检验检疫科学技术研究院， 河北 石家庄 050051)

*王建昌，男，高级兽医师，博士，主要从事食源性微生物、动物疫病分子生物学方面的研究，通信作者。

蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)是革兰氏阳性兼性厌氧菌，是食品污染常见的致病菌之一[1]，具有代谢通路多样化、营养需求低的特点[2-3]。人体感染后临床症状有恶心、呕吐、腹痛以及腹泻等[4]，食物中毒的发病率高达60%～100%[5]。探索简便、快速、高灵敏性的检测方法是该菌研究的重点。

蜡样芽胞杆菌传统的检测方法操作过程繁琐，检测周期长，需要经验丰富的操作人员。张志鸿等[6]建立real-time PCR方法检测食品中的产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌，周巍等[7]通过环介导等温扩增技术(LAMP)对酸乳中的蜡样芽胞杆菌进行检测，贾雅菁等[8]在LAMP反应体系中加入荧光染料，实现了对蜡样芽胞杆菌的定性荧光监测；但上述方法都不能满足简单、快速的检测特点。重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amp-lification, RPA)因其操作简单、反应快速、不需要昂贵的设备等优势，在医疗诊断、转基因食品和动物疫病检测中受到广泛关注[9]。RPA技术主要依赖于重组酶、单链结合蛋白和具有链置换活性的DNA聚合酶在恒温条件下(25～42 ℃)进行，而实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time recombinase polymerase amplification，real-time RPA)技术将RPA基础反应与荧光探针结合，具备了实时监测扩增进程的优势，灵敏度和特异性也进一步提高，已被广泛运用于细菌、病毒及寄生虫的检测[10]。……