张玲，虞旻珍，张欣，万意佳，宣丽华

(浙江省中医院，浙江 杭州 310006)

穴位贴敷对变应性鼻炎大鼠IL-4、LTC4的影响

张玲，虞旻珍，张欣，万意佳，宣丽华*

(浙江省中医院，浙江 杭州 310006)

目的：观察采用本院治未病贴膏进行穴位贴敷治疗对AR模型大鼠的治疗效应及对IgE、IL-4、LTC4的影响。方法：选用40只SPF级健康SD大鼠，盐水对照组、模型组、贴敷治疗组、丙酸氟替卡松组，采用OVA与氢氧化铝腹腔注射及OVA滴鼻诱发制备AR模型，盐水对照组予以同样剂量的生理盐水。观察大鼠鼻部症状，记录嗜酸性粒细胞数，检测血IgE、IL-4水平及鼻腔灌洗液LTC4表达。 结果：1.与对照组比较，模型组大鼠鼻黏膜组织中EOS数量显著上升(P<0.01)；穴位贴敷组、丙酸氟替卡松组与模型组比较， EOS数量显著降低(P<0.01)；2.与盐水对照组比较，模型组大鼠外周血清IgE、IL-4含量显著升高(P<0.05)；与模型对照组比较，贴敷治疗组与丙酸氟替卡松对照组血清IgE、IL-4含量均显著降低(P<0.05)；3.与盐水组比较, 模型组大鼠鼻腔灌洗液中的LTC4含量明显增高(P<0.01)；模型组比较，穴位贴敷组鼻腔灌洗液中的LTC4含量减低(P<0.05)。结论：采用治未病贴膏穴位贴敷治疗可调节IgE、IL-4 、LTC4水平，显著改善AR大鼠变应性反应。

穴位贴敷;变应性鼻炎;IL-4;LTC4

变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)也称过敏性鼻炎，临床表现以鼻痒、打喷嚏、流清涕等为主要症状，为接触变应原后由IgE介导的炎症而引起的鼻部症状性疾病。变应性鼻炎发病率高，具有反复发作、迁延难愈的特点，临床实践显示三伏天行穴位贴敷治疗对AR有良好的防治效果，具有副作用小、远期疗效好的特点[1-3]。本课题组在多年临床实践基础上制成治未病贴膏，前期研究结果显示，“治未病”贴膏穴位贴敷可显著改善对变应原性物质的反应及哮喘、喷嚏、鼻痒等症状，减少发作次数，具有良好疗效。本实验通过动物实验进一步探究穴位贴敷治疗对免疫因子IL-4、LTC4的影响，以研究其靶点与作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

本动物实验过程中严格遵守“3R”原则(Reduction，Replacement，Refinement)以及实验动物关怀和使用的指导原则。共选用40只SPF级SD大鼠，雌雄各半，体质量为180～230g，由浙江中医药大学动物实验中心提供，生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016，随机分为4组：盐水对照组、AR模型组(以下简称模型组)、穴位贴敷组、丙酸氟替卡松组。

1.2 主要仪器与试剂

天平：上海医疗器械厂；4℃冰箱：杭州华日电冰箱厂；移液器：德国Epperdorf公司；Rnase-free枪头：Axygen公司；鱼跃空气压缩式雾化器：江苏鱼跃医疗设备股份有限公司。卵清蛋白(OVA)：美国Sigma公司；AlCl3：阿拉丁试剂上海分公司；NaOH：杭州萧山化学试剂厂；0.9%氯化钠注射液：上海百特医疗用品有限公司；丙酸氟替卡松鼻喷雾剂：英国葛兰素史克制药集团；穴位贴敷中药：浙江省中医院中药房提供。

1.3 模型制备

模型组、穴位贴敷组、丙酸氟替卡松组的SD大鼠采用OVA结合氢氧化铝致敏法建立AR模型，方法如下：(1)基础致敏：腹腔注射由OVA 0.3 mg、氢氧化铝30 mg和生理盐水1 mL制成的混悬液，隔日1次，共 7 次。(2)激发：完成腹腔注射OVA后，每日予5%OVA滴鼻50 μL(侧/d)及1%OVA的超声雾化吸入(5 min/天)，连续7 d。盐水组每日给予注射及吸入同等剂量的生理盐水。

1.4 治疗方法

穴位贴敷组的穴位选择：选取大椎及双侧的肺俞、脾俞、肾俞(李宗仁主编《实验针灸学》大鼠穴位)。大椎：第7颈椎与第1胸椎间，背部正中。肺俞：第三胸椎下两旁肋间。脾俞：第12胸椎下两旁肋间。肾俞：第二腰椎下两旁。穴位贴敷组的药物选择：选用生白芥子、延胡索、生甘遂、细辛、冰片按1∶1∶0.5∶0.5∶0.1的比例研细末，混匀后用水调和制成糊状；并将中药贴膏制成直径为0.5 cm，厚约0.1 cm规格的药饼。操作：造模成功后，将大鼠皮肤脱毛后选取相应的大椎、肺俞、脾俞、肾俞进行穴位贴敷治疗。每次贴敷时间为2 h，隔日1次，连续治疗2周。

丙酸氟替卡松组：造模成功后，选取丙酸氟替卡松滴鼻，单侧鼻孔，每次50 μg，每天1次，连续治疗2周。

盐水对照组与模型组：造模成功后，选取生理盐水滴鼻，单侧鼻孔，每次50 μg，每天1次，连续2周。

1.5 观察指标

行为学观察：观察治疗后大鼠鼻痒、喷嚏、流涕等行为的变化。

治疗结束后取大鼠鼻腔灌洗液及鼻中隔，检测嗜酸性粒细胞、IgE及LTC4各项指标。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 大鼠体征观察

造模成功评价指标采用行为学评分(赵秀杰等[20]的症状评分表)判定：末次激发后0.5 h及给药后2 h观察动物的搔鼻、打喷嚏、流涕三项症状，进行量化评分，评分>5分表示造模成功。见表1。

表1 症状评分表

2.2 大鼠鼻中隔黏膜嗜酸性粒细胞(EOS)计数

模型组与盐水对照组比较，大鼠鼻黏膜组织中的EOS数量明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；穴位贴敷组、丙酸氟替卡松组与模型组比较，大鼠鼻黏膜组织中的EOS数量明显降低，有显著性差异(P<0.01)；穴位贴敷组与丙酸氟替卡松组比较，大鼠鼻黏膜组织中的EOS未见明显差异(P>0.05)。见图1。

表2 各组大鼠鼻中隔黏膜嗜酸性粒细胞(EOS)计数

注：与盐水对照组比较，△P<0.01;与模型组比较，*P<0.01

图1 各组大鼠鼻黏膜HE染色图

2.3 外周血IgE、IL-4含量

与盐水对照组比较，模型组大鼠外周血清IgE、IL-4含量明显升高(P<0.05)；与AR模型组比较，贴敷治疗组和丙酸氟替卡松对照组IgE、IL-4含量显著降低(P<0.05)；与丙酸氟替卡松对照组比较，穴位贴敷组与丙酸氟替卡松组未见显著差异(P>0.05)。见表3。

表3 外周血IgE、IL-4含量

注：与盐水对照组比较，★P<0.05；与模型组比较，▲P<0.05

2.4 大鼠鼻腔灌洗液白三烯C4(LTC4)

与盐水对照组比较, 模型组大鼠鼻腔灌洗液中的LTC4含量明显增高(P<0.01)；模型组比较，穴位贴敷组鼻腔灌洗液中的LTC4含量减低(P<0.05)；与丙酸氟替卡松组比较，穴位贴敷组大鼠鼻腔灌洗液中的LTC4含量差异未见显著差异(P>0.05)。见表4。

表4 大鼠鼻腔灌洗液白三烯C4(LTC4)结果

注：与盐水对照组比较，△P<0.01;与模型组比较，*P<0.05

3 讨论

变应性鼻炎(AR)发病率占鼻科疾病首位，具有反复发作、迁延难愈的特点。目前西医治疗采用脱敏、免疫及激素等方法，虽短期疗效良好但停药后效果难以维持，且部分药物副作用明显。多项研究报道证实中医药、针灸治疗对AR有良好的治疗效果，且具有副作用小、远期疗效好的特点。穴位贴敷疗法是中药治疗结合经络腧穴理论，采用的防病治病的一种疗法。以中药制剂贴敷于相关脏腑腧穴可振奋阳气，从而达到预防及治疗因阳虚卫外不固而易患之“鼻鼽、哮病、喘病”等疾病的目的，方法简便易行，治疗时间短，临床治疗中已应用多年。

变应性鼻炎中医称之为“鼻鼽”，首见于《黄帝内经》“鼽者，鼻出清涕也”“鼽者，鼻中痒而气嚏作于声也”。唐代孙思邈从肺、肾虚论治本病，东垣认为其属虚、属寒，明清医家则多从“肺脾气虚”辨治。本课题组采用贴膏是在中医“冬病夏治”“治未病”理论指导下，吸取现代医学与透皮给药系统理论制成，其中诸药作用为：白芥子性辛温，善走散；甘遂具有泻水饮、破积聚功效；细辛温化寒饮，生姜辛温解表，众药合用散寒化饮，益气固表。本课题组对药物制备方法进行改良制成现有药剂，贴敷于肺脾肾相关背俞穴，临床实践证明对患者皮肤刺激及不良反应较小，安全有效[2-3]。

AR是指机体在接触应原后主要由IgE介导的致敏介质释放，引起大量免疫细胞因子参与的鼻黏膜变态反应性疾病。嗜酸粒细胞是炎症变化的特征标志，病理过程伴有血清IgE升高与嗜酸性粒细胞增多[4]，本实验结果表明穴位贴敷可有效降低IgE水平，减少嗜酸性粒细胞数量，从而控制致敏介质引起的鼻黏膜反应，减轻临床症状。

目前研究多认为AR发生与 Th1/Th2 免疫失衡密切相关，可见其炎症病理过程中表现出鼻黏膜Th2免疫反应占显著优势[5]。IL-4有利于Th2细胞的分化,是AR病理过程中重要的炎性因子，可明显增强免疫球蛋白类物质转换为 IgG 及IgE，诱发IgE 的基因重组及启动信使RNA 的转录，从而增强IgE 产生[6-7]，在少量抗原刺激下显著增强免疫应答，发生变应性炎症反应[8]。白三烯(LTs)是花生四烯酸的代谢产物之一，包括LTC4、LTD4和LTE4。目前研究显示在哮喘与AR发病过程中，当机体受到致敏物质刺激时LT尤其是LTC4释放增加[9]，促进炎症细胞向气道集聚，引起气道平滑肌收缩[10-11]，血管通透性增加及黏液分泌，增加鼻的气道阻力，加重鼻堵塞，引起呼吸道炎症与气道高反应性，在变应性鼻炎的病理过程中起着重要作用。本实验结果显示AR模型大鼠IL-4、LTC4表达升高，与盐水组有显著差异，经穴位贴敷后明显降低，可证实穴位贴敷可通过调节IL-4、LTC4水平控制鼻黏膜炎症。

本课题组所改良中药制剂治疗气道炎症已有多年临床经验，并已获得国家专利，而目前生物学机制尚未阐明，本实验初步证实本制剂可有效改善鼻炎症状，调控鼻黏膜嗜酸性粒细胞水平，此作用是通过调节相关炎症因子如IL-4、LTC4，影响TH1/TH2免疫平衡起效，其系统机制尚有待进一步深入研究。

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[2] 宣丽华,虞彬艳,徐福,等.不同刺激强度穴位贴敷冬病夏治防治哮喘的临床研究[J].中华中医药杂志,2012,27(7):1807-1810.

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ImpactofAcupointApplicationonIL-4andLTC4inRatswithAllergicRhinitis

ZHANG Ling, YU Min-zhen, ZHANG Xin, WAN Yi-jia, XUAN Li-hua

(ZhejiangProvincialHospitalofTCM,Hangzhou310006,China)

Objective: To study the effect of acupoint application therapy with Zhiweibing(preventive treatment of disease) patch on AR(allergic rhinitis) rats, and its influence to serum IgE, IL-4 and LTC4. Methods:40 SD rats were randomly divided into the blank control group, AR model group, acupoint application group, and fluticasone propionate group. AR models were established by injecting OVA and aluminium hydroxide, and nasal inhalation of OVA. The blank control group was given normal saline. Nasal symptoms, eosinophils(EOS) amount, levels of IgE and IL-4, and expression of LTC4 were observed and tested. Results: In terms of EOS amount, it was significantly increased in the model group compared to the blank control group(P<0.01); and it was decreased greatly after the treatment(P<0.01); in terms of serum IgE and IL-4, they were both became higher after modeling(P<0.05), and they were reduced obviously in the acupoint application group and fluticasone propionate group(P<0.05); in terms of LTC4 expression, it was increased significantly in the model group compared to the blank control group(P<0.01), it was decreased greatly in the acupoint application group compared to the model group. Conclusion: Acupoint application can regulate IgE, IL-4 and LTC4 to improve allergic reaction in AR rats.

Acupoint application; Allergic rhinitis; IL-4; LTC4

R245.9

A

1002-2392(2017)06-0037-03

2016-10-24

2017-09-01

浙江省重大科技专项计划(2014C03046-2)

张玲(1978-),女,博士，主治医师，研究方向：针灸神经生物学机制。

*通讯作者：宣丽华(1960-)，女，教授，主任医师，研究方向：针灸的神经生物学机制。