乔雅丽，董自星，2，*，宋鹏，刘晓光，2，路福平

（1.天津科技大学生物工程学院，天津300457；2.天津科技大学化工与材料学院，天津300457）

黑曲霉天冬氨酰氨肽酶的分子克隆与酶学性质解析

乔雅丽1，董自星1，2，*，宋鹏1，刘晓光1，2，路福平1

（1.天津科技大学生物工程学院，天津300457；2.天津科技大学化工与材料学院，天津300457）

以黑曲霉CICIM F0510的互补DNA（complementary DNA，cDNA）为模板，通过PCR扩增出一个新的天冬氨酰氨肽酶基因（vacuolar aspartyl aminopeptidase，vaap），并成功将其在毕赤酵母GS115中进行表达。摇瓶水平上，重组菌GS115（pPIC9K-vaap）的氨肽酶酶活达到39.7 U/mL。该酶的最适反应温度和pH值分别为55℃和9.5；在90℃或pH 8.0～10.0孵育1 h后，该酶仍能保持20%或80%以上的酶活；Sn2+和Co2+对其酶活有明显促进作用，Fe3+、Ca2+、EDTA和SDS对其有抑制作用；该酶对L-亮氨酰对硝基苯胺（Leu-pNA）的Km和Vmax分别是12.96 mmol/L和2.14 μg/（mL·min）。在所测的8种底物中，Leu-pNA是Vaap最适底物，且它对丙氨酸对硝基苯胺（Ala-pNA·HCl）和赖氨酸对硝基苯胺（Lys-pNA·2HCl）也有一定的水解能力。

天冬氨酰氨肽酶；黑曲霉；分子克隆；酶学性质

氨肽酶（Aminopetidases，EC 3.4.11）是一类外切蛋白酶，能水解蛋白或多肽链的N端特定肽键，释放出相应的游离氨基酸[1]。不同氨肽酶对N端氨基酸残基的水解能力存在差异性，同一种氨肽酶对不同的N端氨基酸残基的水解能力也不同。根据底物特异性的不同，可将氨肽酶细分为天冬氨酰氨肽酶、亮氨酸氨肽酶、缬氨酸氨肽酶、苯丙氨酸氨肽酶和脯氨酸氨肽酶等[2]。氨肽酶由于其独特的水解和脱苦性能，在食品工业中特别是营养保健品和调味品的制造方面潜力巨大。与其它蛋白酶复合使用可以深度水解蛋白质，促进良好风味的形成[3-4]；……