曾海娟，刘武康，谢曼曼，丁承超，董庆利，刘 箐*

（上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093）

单核细胞性李斯特菌基因dal的敲除及其生物学特性初步分析

曾海娟，刘武康，谢曼曼，丁承超，董庆利，刘 箐*

（上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093）

在单核细胞性李斯特菌（Listeria monocytogenes）野生株EGDe actA及in lB双基因缺失株（EGDe ΔactAΔinlB）的基础上，利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株（EGDe ΔactAΔinlBΔdal），并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、生物被膜的形成量及细胞侵袭等方面作进一步分析。结果显示，37 ℃摇床培养6 h后，缺失株的菌浓度显著低于EGDe ΔactAΔinlB（P＜0.001），培养基中补充D-丙氨酸的缺失株生长速率与亲本株相比无显著差异；实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示，缺失株的sigB基因表达水平变化最明显（P＜0.01），约下调90%；缺失株生物被膜形成量显著增加（P＜0.05），培养基补充D-丙氨酸后缺失株生物被膜的生成量与亲本株相比无差异；对Coca-2细胞的侵袭无影响，表明该基因对细菌生长能力及生物被膜形成具有重要的调控作用，并不影响菌株对细胞的侵袭力。此缺失株的构建为进一步研究基因dal的功能提供了理论支持。

单核细胞性李斯特菌；基因敲除；生长能力；细胞侵袭；生物被膜

单核细胞性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种重要的革兰氏染色阳性食源性致病菌，在自然环境中广泛分布[1]。单核细胞性李斯特菌具有较强的生存能力，pH 4.5～9、温度0～45 ℃均可增殖[2]，在干酪、原奶、冰淇淋、生肉、海鲜及方便食品，如：熟肉、熏鱼中均有检出[3-6]。超过99%的单核细胞性李斯特菌感染是由于食用了被该菌污染的食物[7]，死亡率达30%以上。……