丁承超 陈国薇 谢曼曼 郭 亮 李 杰 孙静娟 刘 箐

(上海理工大学医疗器械与食品学院，上海200093)

·基础免疫学·

基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株构建①

丁承超 陈国薇 谢曼曼 郭 亮 李 杰 孙静娟 刘 箐

(上海理工大学医疗器械与食品学院，上海200093)

目的：利用减毒单增李斯特菌作为疫苗载体的优势，拟构建基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株。方法：使用单增李斯特菌表达载体pERL3过表达弧菌中共同的靶标抗原Ompk；利用PCR和RT-PCR技术分别对过表达菌株鉴定和抗原基因的检测。结果：PCR结果显示成功构建3株Ompk过表达菌株Lm-Ompk(L-O)、Lm-Lmo0576-Ompk(L-L-O)和Lm-P-Ompk(L-P-O)；测序结果显示过表达菌株中外源基因的序列与NCBI 结果相似性为100%；RT-PCR结果显示Ompk基因在3株过表达菌株中的转录水平均极为显著(P<0.001)；在抗生素条件下，Ompk基因在各过表达菌株中的表达水平显著高于在非抗性条件下的转录水平(P<0.05)。结论：成功构建了3株基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株，弧菌中共同的靶标抗原Ompk在3株重组菌株中均可以稳定表达。

减毒单增李斯特菌；疫苗载体；弧菌疫苗；Ompk；抗原基因

单核细胞增生性李斯特菌(Listeriamonocy-togenes,Lm)是一种革兰阳性兼性厌氧胞内寄生条件致病菌。该菌可穿越肠道屏障、血脑屏障和胎盘屏障，引起人和动物的胃肠炎、脑膜炎、败血症[1,2]。Lm具有典型的胞内寄生和胞间传递等特性，减毒后作为疫苗载体，能够同时将外源性抗原表位加载于MHCⅠ和MHCⅡ抗原递呈系统，刺激机体产生强烈的细胞免疫应答[3,4]。目前，actA/plcB、hly、prfA、actA等单个或者多个毒力基因敲除减毒Lm已应用于肿瘤、病毒等DNA疫苗载体中，部分疫苗已经进入Ⅰ期、Ⅱ期临床实验[5,6]。因此Lm已成为最重要的减毒活载体疫苗载体之一。另外，目前并未发现Lm的胞内寄生和其致病性的必然关系，比如目前关于其致病性报道最多的是其可随食品传染人类并导致严重的疾病，甚至死亡，但对其原始宿主，如牛、猪、羊等畜类，并未发现其严重的致病性，这为其作为除人类之外的动物减毒疫苗载体提供了可能性。……