李永超 朱 瑞 徐龙发 巫洋涛 赵 欢 吴 坤 刘东晓 程 通 夏宁邵

(厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室，国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，厦门361102)

·免疫学技术与方法·

以乙肝病毒核心蛋白为载体制备肠道病毒71型非结构蛋白3D单克隆抗体①

李永超 朱 瑞 徐龙发 巫洋涛 赵 欢 吴 坤 刘东晓 程 通 夏宁邵

(厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室，国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，厦门361102)

目的：预测肠道病毒71型(EV71)非结构蛋白3D的表位，以HBc蛋白为载体展示多肽，制备并鉴定抗EV71-3D的特异性单克隆抗体(mAb)。方法：应用生物信息学方法分析预测出EV71 3D蛋白亲水性和免疫原性指数较高的多肽片段，并运用HBc颗粒型蛋白载体展示肽段，构建多肽融合蛋白，免疫BALB/c雌鼠，通过杂交瘤技术和亲和层析技术制备和纯化抗EV71-3D蛋白的特异性mAb，用间接ELISA、ELISPOT、IFA和IHC对mAb的性质进行初步鉴定。结果：构建表达分别嵌合3D蛋白34～43位氨基酸残基、 61～76位氨基酸残基、151～164位氨基酸残基的HBc重组蛋白，免疫并经过多轮克隆化筛选，获得抗EV71-3D单克隆抗体3E1，其亚类为IgG2a；免疫荧光试验、ELISPOT法和免疫组织化学染色结果显示其可与EV71特异性结合。结论：成功制备可特异性识别EV71的单克隆抗体3E1，为病毒的检测及进一步研究3D蛋白的功能奠定了基础，同时还验证了生物信息学技术与HBc颗粒型载体展示多肽技术相结合可快速高效地制备单克隆抗体。

乙肝病毒核心蛋白；……