原向伟+黄秀芳

[摘要] 目的 研究姜黄素对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其机制。 方法 采用姜黄素单体处理人骨肉瘤U2OS细胞，通过台盼蓝拒染法检测细胞增殖活力，采用流式细胞术和DNA Ladder检测凋亡，通过Westernblot法检测p53和caspase-3的表达。 结果 4、8、16、32、64μmol/L姜黄素处理U2OS细胞48h，生长抑制率为：（9.21±3.11）%、（16.85±3.95）%、（29.57±5.33）%、（52.30±6.07）%和（79.16±6.78）%。姜黄素（16μmol/L）在24、48和72h均可诱导U2OS细胞凋亡，凋亡率为：（18.8±3.05）%、（29.6±5.22）%和（57.3±6.62）%，姜黄素（16μmol/L）作用72h后，DNA电泳显示梯形条带改变。并且姜黄素作用48h可明显上调p53的表达和caspase-3的活化。 结论 姜黄素可抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖，并通过p53-caspase-3通路诱导凋亡。

[关键词] 骨肉瘤；姜黄素；细胞增殖；凋亡

[中图分类号] R738.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）13-30-04

[Abstract] Objective To evaluate the effect of curcumin on proliferation and apoptosis in osteosarcoma cells and study its mechanisms. Methods Human osteosarcoma U2OS cells were treated with curcumin monomer.Trypan blue exclusion test was performed to evaluate the cell proliferation.Flow cytometry analysis and DNA Ladder assay were performed to examine the cell apoptosis.Westernblot assay was used to detect the expression of p53 and caspase-3. Results After treatment with curcumin （4，8，16，32，64μmol/L） for 48h，the inhibition rates of U2OS cells were （9.21±3.11）%，（16.85±3.95）%，（29.57±5.33）%，（52.30±6.07）%and（79.16±6.78）%.Curcumin （16μmol/L） induced apoptosis in U2OS cells at 24，48，72h.The apoptotic rates were （18.8±3.05）%，（29.6±5.22）% and（57.3±6.62）%.DNA electrophoresis showed ladder change after treatment with curcumin（16μmol/L） for 72h.The expression of p53 and caspase-3 activation were increased after curcumin treatment for 48h. Conclusion Curcumin decreases proliferation and induces apoptosis through p53-caspase-3 pathway in osteosarcoma U2OS cells.

[Key words] Osteosarcoma；Curcumin；Proliferation；Apoptosis

骨肉瘤是人类最常见的骨组织原发恶性肿瘤，常发于青少年，恶性度极高，目前常用治疗方法为新辅助化疗和手术治疗，但疗效差，预后不佳[1-2]，因此寻找治疗骨肉瘤的新方法具有重要意义。中药抗肿瘤已有上千年的历史，随着中药现代化进程，针对具有抗肿瘤效应的部分中草药，提取其有效成分并进行深入研究，已成为肿瘤治疗的研究新方向[3]。姜黄素（curcumin）是提取自中药姜黄的一种单体植物多酚，具有多种药理作用，包括抗肿瘤、抗炎、抗凝、降血脂等[4-5]，其可以抑制肺癌、胃癌、膀胱癌等多种肿瘤细胞的生长[6-8]，提示了姜黄素在肿瘤治疗中的应用价值。本研究探讨姜黄素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响，以期为拓展骨肉瘤的治疗新方法提供依据。

1 材料与方法

1.1 细胞培养

人类骨肉瘤U2OS细胞来自中山大学病理教研室，培养液为含10%胎牛血清（购自GIBCO公司）、100μg/mL链霉素和100U/mL青霉素的DMEM（购自GIBCO公司），培养于5%CO2培养箱（37℃）。……