张丽香

Bacillus subtilis ZH168多酚氧化酶特性研究

张丽香

（北京市经济管理学校，北京100142）

从Bacillus subtilis ZH168发酵液中提取多酚氧化酶，通过分光光度计法对其pH值、温度、底物、抑制剂及激活剂等特性进行研究。结果表明，邻苯二酚做底物时，pH值为7时活性最大，多巴做底物时最适pH值为8；该酶最适温度40℃，具有较好热稳定性；多酚氧化酶可催化不同酚类物质，催化活性不同；SDS，Triton X-100和尿素对酶均具有激活作用；Cys，NaHSO3，EDTA，VC，苯甲酸和Gly对酶有抑制作用；金属离子Cu2+可以显著提高酶活，Al3+和Mn2+显著抑制酶活。

黑色素；枯草芽孢杆菌；酪氨酸酶；多酚氧化酶；酶活性

0 引言

黑色素（Melanin）是一种在细菌、真菌、动植物中均有分布的天然色素，其应用前景广阔，可用于研发防晒霜、染发剂、太阳伞、抗紫外眼镜、生物杀虫剂的保护剂等。酪氨酸酶（Tyosinaes）是微生物体内产生的催化黑色素形成的最重要的多酚氧化酶（Polyphenol oxidase，PPO）之一，多酚氧化酶活性控制成为研究的热点问题[1]。已有报道枯草芽孢杆菌能产生催化黑色素形成的多酚氧化酶，且已经被纯化[2]，该酶是一种具有催化活性的蛋白质，不同来源的酪氨酸酶其特性有较大差异[3]，其酶活性受底物、温度、pH值等多种条件影响。试验对Bacillus subtilis ZH168所产胞外多酚氧化酶pH值、温度、底物、激活剂及抑制剂等进行较为系统研究。

1 材料和方法

1.1 材料

供试菌株：产黑色素菌株，B.subtilis ZH168[1]。

培养基：①种子培养基，5 g牛肉膏，10 g蛋白胨，10 g NaCl，pH值7，蒸馏水1 L。②产酶培养基，Fd培养基；LB培养基，酵母浸膏1.5 g、胰蛋白胨1.5 g、NaCl 5 g、蒸馏水1 L；肉汤培养基，5 g牛肉膏，10 g蛋白胨，10 g NaCl，pH值7，蒸馏水1 L培养基121℃蒸汽灭菌20 min，L-Tyr 115℃。

试剂……