李香丹，尹明姬，杨洋，林贞花，咸哲民，李今子

(1延边大学附属医院，吉林延吉133002；2延边大学)



托吡酯腹腔注射后癫痫大鼠海马组织损伤变化及其机制探讨

李香丹1，尹明姬1，杨洋2，林贞花2，咸哲民1，李今子1

(1延边大学附属医院，吉林延吉133002；2延边大学)

目的 观察托吡酯(TPM)腹腔注射后癫痫大鼠海马组织损伤改变，并探讨其可能机制。方法 将40只大鼠依据随机数字表法分为正常组、模型组、TPM低剂量组、TPM高剂量组。模型组、TPM低剂量组、TPM高剂量组采用腹腔注射氯化锂180 mg/kg、匹罗卡品30 mg/kg制作癫痫模型。模型组、TPM低剂量组、TPM高剂量组大鼠分别于癫痫发作后5 h经腹腔注射生理盐水10 mL/(kg·d)、TPM 40 mg/(kg·d)、TPM 80 mg/(kg·d)。各组连续用药4周后处死大鼠取海马组织，HE染色观察大鼠海马组织病理变化；应用基因芯片技术筛选各组差异表达的miRNA，并用实时荧光定量PCR法进行验证；采用TUNEL法检测海马组织凋亡细胞，并计算凋亡细胞数；分别采用Western blotting法、免疫荧光法和免疫组化法检测各组大鼠海马组织中的Caspase-8。结果 与正常组相比，模型组海马组织损伤明显，TPM低剂量组和TPM高剂量组海马组织损伤较模型组减轻，且TPM低剂量组损伤最轻。基因芯片检测发现模型组出现12个表达上调的miRNA和14个表达下调的miRNA，经实时荧光定量PCR验证，只有miR-146a在各组表达的差异有统计学意义。模型组、TPM高剂量组、TPM低剂量组、正常组海马组织中miR-146a相对表达量依次降低(P均<0.05)。细胞凋亡检测发现，与正常组相比，模型组大鼠CA1区、CA3区和DG区凋亡细胞细胞数高于正常组(P均<0.05)，而TPM高剂量组和TPM低剂量组凋亡细胞数低于模型组(P均<0.05)。Western blotting结果显示，模型组Caspase-8蛋白相对表达量高于正常组，模型组、TPM高剂量组、TPM低剂量组Caspase-8蛋白相对表达量依次降低(P均<0.01)。免疫荧光结果显示，与正常组相比，模型组大鼠CA1区、CA3区和DG区Caspase-8阳性细胞数高于正常组(P均<0.05)，TPM高剂量组和TPM低剂量组Caspase-8阳性细胞数低于模型组(P均<0.05)。免疫组化结果显示，模型组IOD值高于正常组，模型组、TPM高剂量组、TPM低剂量组IOD值依次降低(P均<0.05)。结论 TPM腹腔注射可减轻癫痫大鼠海马组织病理改变，减少海马组织细胞凋亡，下调海马组织中miR-146a和Caspase-8的表达，其中40 mg/(kg·d)的TPM较80 mg/(kg·d)效果更加明显。TPM的抗癫痫作用机制可能与调节miRNA表达、减少细胞凋亡、下调Caspase-8表达有关。

癫痫；托吡酯；海马；微小RNA；微小RNA146a；细胞凋亡；含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶8

癫痫是一种慢性神经系统疾病，其中耐药的难治性癫痫占到了1/3[1]。……