卓文基 刘志辉 周琳 陈燕梅 陈涛 孙琦 郭卉欣



·技术交流·

MTB线粒体翻译控制28蛋白在昆虫细胞中的表达和纯化

卓文基 刘志辉 周琳 陈燕梅 陈涛 孙琦 郭卉欣

对MTB线粒体翻译控制(mitochondrial translation control，MTC) 蛋白MTC28基因进行克隆， 构建真核表达质粒并在昆虫细胞中表达MTC28蛋白。采用PCR技术从MTB H37Rv 标准株基因组中扩增MTC28基因片断，MTC28基因片断和质粒pFastbac1经EcoRI和XhoI双酶切，T4 DNH连接酶连接，构建重组质粒pFastbac1-MTC28，转染DH5α感受态细菌，在含有氨苄青霉素溶菌肉汤(lysogeny broth，LB)固体培养基中筛选阳性克隆，挑选生长的菌落进而在含有氨苄青霉素的液体LB培养基中进行细菌克隆。PCR鉴定目的基因插入质粒后，阳性克隆细菌进行质粒(pFastbac1-MTC28)的提取。pFastbac1-MTC28质粒转染DH10 Bac感受态细菌构建重组杆状质粒(Bacmid-MTC28)，用含有庆大霉素、卡那霉素和四环素的液体LB培养基进行细菌克隆，采取蓝白斑技术筛选阳性菌落。PCR鉴定为阳性的细菌进行杆状重组质粒(Bacmid-MTC28)的提取。利用脂质介导的转染技术，将杆状重组质粒(Bacmid-MTC28)转染sf9昆虫细胞中，包装重组杆状病毒，并表达蛋白质。结果成功构建了MTC28真核表达质粒，建立了杆状病毒表达MTC28蛋白的表达体系，并表达MTC28蛋白，通过纯化获得了高纯度且均一化的MTC28蛋白。

分枝杆菌, 结核； 线粒体蛋白质类； 基因, 线粒体； 转染； 质粒； 基因, 昆虫

当前全球面临的结核病疫情十分严峻，但现有结核病疫苗—卡介苗(BCG)免疫保护效果极不稳定，线粒体翻译控制(mitochondrial translation control，MTC：就是线粒体翻译控制)28 蛋白存在于MTB、牛分枝杆菌及少数的卡介菌中，该蛋白可被大多数结核病患者和感染者的血清所识别， 因此 MTC28是一种理想的疫苗候选抗原。……