张凤娟，孙琳洁，李素丽，马纪

(新疆大学 生命科学与技术学院，新疆生物资源基因工程重点实验室，新疆 乌鲁木齐, 830046)

荒漠昆虫小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698对酿酒酵母的低温保护作用

张凤娟，孙琳洁，李素丽，马纪*

(新疆大学 生命科学与技术学院，新疆生物资源基因工程重点实验室，新疆 乌鲁木齐, 830046)

昆虫抗冻蛋白作为天然无毒副作用的低温和冷冻保护剂，在发酵菌种的保藏方面具有很好应用前景。为了验证荒漠昆虫小胸鳖甲(Microderapunctipennis)抗冻蛋白MpAFP698对酵母菌的抗冻和抗低温保护效果，对MpAFP698抗冻蛋白进行原核表达和纯化，获得了具有活性的融合抗冻蛋白MBP-MpAFP698。将质量浓度为1、10、30 μg/mL的MBP-MpAFP698添加到酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中，在-7和-20 ℃冷冻处理酵母菌液不同时间；以10 μg/mL的抗冻蛋白在4、0、-50 ℃处理酵母菌液，在-20 ℃反复冻融处理，观察菌落形态并统计菌种存活率。结果表明，添加抗冻蛋白组的酵母存活率显著优于未加抗冻蛋白的对照组，1 μg/mL就有保护效果，10 μg/mL保护效果最好，说明昆虫抗冻蛋白能以极低的浓度发挥低温保护作用。

荒漠昆虫抗冻蛋白；酿酒酵母；抗冻保护；细胞存活

抗冻蛋白(antifreeze protein，AFP)是变温生物为适应严酷的寒冷环境而产生的。抗冻蛋白能够降低溶液的冰点但不改变其熔点，从而产生熔点与冰点之间的温度差值，这个差值叫做热滞活性(thermal hysteresis activity，THA)，其大小用于指示抗冻蛋白的活性[1-2]。AFP的主要功能包括抑制冰晶生长[3-4]、改变冰晶形态和抑制重结晶[5]，并且对细胞膜也有保护作用[6-11]。不同生物的抗冻蛋白活性差异巨大，其中昆虫抗冻蛋白的热滞活性最高[12]。……