肖亚朋，沈微，李婷霖，陈献忠，樊游

1(江南大学，工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡，214122)2(江南大学，中国高校工业微生物资源数据平台，江苏 无锡，214122)

嗜热脂肪土芽孢杆菌普鲁兰酶基因的异源表达及重组酶性质

肖亚朋1，沈微2*，李婷霖1，陈献忠1，樊游2

1(江南大学，工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡，214122)2(江南大学，中国高校工业微生物资源数据平台，江苏 无锡，214122)

用PCR方法扩增得到嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)XQ3506的普鲁兰酶编码基因GsP，在大肠杆菌中进行异源表达。在没有外源信号肽的条件下，重组酶部分分泌到周质中，少量分泌到培养液中。重组酶表观分子量约为81 kDa，纯酶比活力为38.2 U/mg。重组酶最适温度为60 ℃，能短时耐受70 ℃高温；重组酶最适pH6.5，在pH5.5～7.5的范围内具有较好的稳定性；重组酶Km值为0.086 μmol/L，Vmax为0.083 μmol/min；K+和Mg2+对重组酶有激活作用，而Ca2+则有抑制作用。重组酶水解普鲁兰糖产物为单一麦芽三糖，对直链淀粉未发现降解作用，是一种I型普鲁兰酶。重组酶GsP在直链淀粉、抗性淀粉生产和粉丝酶法生产工艺中有一定的应用前景。

嗜热脂肪土芽孢杆菌；异源表达；I型普鲁兰酶；蛋白纯化；酶学性质

普鲁兰酶是一类淀粉脱支酶，目前工业化生产的普主要是针对淀粉制糖工业中的糖化工艺开发的耐酸性普鲁兰酶[1-3]。近年来，随着社会发展和产品的日益丰富，以普鲁兰酶为催化剂的新产品和新工艺不断被开发，例如以普鲁兰糖为原料的麦芽三糖制作工艺[4]，以淀粉为原料的直链淀粉、抗性淀粉[5-7]生产工艺，以及粉丝酶法生产工艺[8]等都需要用到普鲁兰酶。……