罗丹，靳晓，牛丹丹*，谢银珠，林娟，叶秀云

1(福州大学 生物科学与工程学院，福建省海洋酶工程重点实验室，福建 福州, 350116)2(福建福大百特科技发展有限公司，酶高效表达国家工程实验室，福建 福州, 350002)

地衣芽胞杆菌α-淀粉酶酸性pH稳定性提升突变体的生化特征

罗丹1，靳晓1，牛丹丹1*，谢银珠2，林娟1，叶秀云1

1(福州大学 生物科学与工程学院，福建省海洋酶工程重点实验室，福建 福州, 350116)2(福建福大百特科技发展有限公司，酶高效表达国家工程实验室，福建 福州, 350002)

地衣芽胞杆菌α-淀粉酶(Bacilluslicheniformisα-amylase, BLA) 的pH稳定性在提升发酵生产过程特别是后提取工段的操作稳定性，提高产品得率，弱化酶成品贮存条件和延长货架期等方面具有重要价值。该研究对1株能够合成更好pH稳定性BLA的地衣芽胞杆菌B186 1-1的BLA进行了分子克隆、序列分析及性质研究，与模式菌株ATCC14580来源的BLA氨基酸序列相比发现，有4个位点的差异，包括：N4K、R134L、E243D和S320A。进一步克隆表达与纯化了该菌株的BLA，重组酶在80 ℃、pH 6.0～7.5下显示最高活性；在pH 5.0下放置1 h，该酶保留80%以上酶活力，而来源于菌株ATCC14580的BLA在此相同条件下仅保留约10%酶活力；通过3D结构模拟分析显示BLA中的差异性碱基与其pH稳定性存在相关关系。

高温α-淀粉酶；天然突变体；pH稳定性；酶学性质

地衣芽胞杆菌α-淀粉酶(Bacilluslicheniformisα-amylase，BLA，EC 3.2.1.1)，又称高温α-淀粉酶，是工业上极其重要的高温淀粉液化酶，可以以随机作用方式水解淀粉分子内的α-1,4-糖苷键，将其水解为糊精和一系列以葡萄糖为组成单位的低聚糖[1-2]，被广泛应用于食品、制药、纺织、造纸、洗涤液、饲料及石油开采等多种领域，占全球淀粉加工酶制剂总用量的30%[3-4]。……